角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)胸腺增殖作用的研究.pdf

1、目的： 1.觀察角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)老齡鼠萎縮胸腺的增殖作用。 2.觀察角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)放療所致萎縮胸腺的增殖作用。 3.觀察角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)環(huán)磷酰胺引起萎縮胸腺的增殖作用。 4.觀察體外培養(yǎng)的情況下，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)胸腺上皮髓質(zhì)來(lái)源1C6細(xì)胞和皮質(zhì)來(lái)源4C18細(xì)胞的增殖作用。 5.檢測(cè)胸腺上皮細(xì)胞來(lái)源1C6和4C18細(xì)胞中KGF受體mRNA表達(dá)情況。 方法： 1、15個(gè)月BA

2、LB/C雄性老齡鼠10只，隨機(jī)分為KOF處理組和對(duì)照組，每組各5只，連續(xù)7天分別給予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理鹽水，4周后檢測(cè)小鼠胸腺和脾臟、淋巴結(jié)的細(xì)胞總數(shù)，流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)胸腺組織中CD4單陽(yáng)性(CD4SP)、CD8單陽(yáng)性(CDSSP)、CD4CD8雙陽(yáng)性(DP)、CD4CD8雙陰性(DN)以及脾臟、淋巴結(jié)和外周血中CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的比例。 2、正常BALB/C雄性小鼠15只，隨機(jī)

3、分為KGF處理組，對(duì)照組和正常組，每組各5只，KGF處理組和對(duì)照組均先給予4.5Gy鈷射線照射，24小時(shí)后分別連續(xù)7天給予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理鹽水，正常組不經(jīng)過(guò)任何處理。4周后檢測(cè)小鼠胸腺和脾臟、淋巴結(jié)的細(xì)胞總數(shù)，流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)胸腺組織中CD4單陽(yáng)性(CD4SP)、CD8單陽(yáng)性(CD8SP)、CD4CD8雙陽(yáng)性(DP)、CD4CD8雙陰性(DN)以及脾臟、淋巴結(jié)和外周血中CD4SP、CDSSP各T細(xì)胞亞

4、群的比例。 3、正常BALB/C雄性小鼠10只，隨機(jī)分為KGF處理組和對(duì)照組，每組各5只，KGF處理組和對(duì)照組均先腹腔注射環(huán)磷酰胺(300 mg/kg)3天，24小時(shí)后再分別連續(xù)7天給予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理鹽水。2周后檢測(cè)小鼠胸腺和脾臟、淋巴結(jié)的細(xì)胞總數(shù)，流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)胸腺組織中CD4單陽(yáng)性(CD4SP)、CD8單陽(yáng)性(CDSSP)、CD4CD8雙陽(yáng)性(DP)、CD4CD8雙陰性(DN)以及脾臟

5、、淋巴結(jié)和外周血中CD4SP、CDSSP各T細(xì)胞亞群的比例。 4、體外實(shí)驗(yàn)：鼠胸腺上皮髓質(zhì)來(lái)源1C6細(xì)胞和皮質(zhì)來(lái)源4C18細(xì)胞，分別經(jīng)含不同濃度(25、50、100、200、400、800 ng/ml)的KGF和不含KGF的完全培養(yǎng)液(對(duì)照組)作用48小時(shí)和72小時(shí)，采用噻唑藍(lán)(MTT)法分析細(xì)胞增殖活性。 5、RT-PCR技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胸腺上皮髓質(zhì)來(lái)源的1C6細(xì)胞和皮質(zhì)來(lái)源的4C18細(xì)胞中KGF受體mRN

6、A表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、在老齡鼠的實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，與對(duì)照組相比，KGF處理組平均胸腺細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)以及KGF處理組平均脾細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CDSSP各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)均有明顯增加(均P<0.05)，但是KGF處理組淋巴結(jié)平均細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)以及外周血中CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的比例沒(méi)有

7、顯著變化。 2、放療處理實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，與對(duì)照組相比，KGF處理組平均胸腺細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)以及KGF處理組平均脾細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)均有明顯增加(均P<0.05)，但是KGF處理組淋巴結(jié)平均細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)以及外周血中CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的比例沒(méi)有顯著變化。與正常組相

8、比，KGF處理組各值均沒(méi)有顯著變化。 3、環(huán)磷酰胺處理實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，與對(duì)照組相比，KGF處理組平均胸腺細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CDSSP、DP、DN各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)以及KGF處理組平均脾細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)均有明顯增加(均P<0.05)，但是KGF處理組淋巴結(jié)平均細(xì)胞總數(shù)和CD4SP、CDSSP各T細(xì)胞亞群的平均細(xì)胞數(shù)以及外周血中CD4SP、CD8SP各T細(xì)胞亞群

9、的比例沒(méi)有顯著變化。 4、MTT法檢測(cè)顯示，在低濃度(<200 ng/ml)時(shí)，1C6細(xì)胞增殖率隨KGF濃度的增加不斷升高；當(dāng)KGF濃度為200 ng/ml時(shí)，1C6細(xì)胞增殖率達(dá)到最高值；而在高濃度(>200 ng/ml)時(shí)，1C6細(xì)胞增殖率隨KGF濃度的增加又逐漸下降；與對(duì)照組比較，濃度為100、200、400ng/ml的KGF對(duì)1C6細(xì)胞具有明顯的促增殖作用(均P<0.05)。而在低濃度(<100 ng/ml)時(shí)，4C18細(xì)

10、胞增殖率隨KGF濃度的增加不斷升高；當(dāng)KGF濃度為100 ng/ml時(shí)，4C18細(xì)胞增殖率達(dá)到最高值；而在高濃度(>100 ng/ml)時(shí)，4C18細(xì)胞增殖率隨KGF濃度的增加又逐漸下降；與對(duì)照組比較，濃度為50、100、200、400 ng/ml的KGF對(duì)4C18細(xì)胞具有明顯的促增殖作用(均P<0.05)。 5、RT-PCR技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)表明胸腺上皮髓質(zhì)來(lái)源的1C6細(xì)胞和皮質(zhì)來(lái)源的4C18細(xì)胞中均有KGF受體mRNA

11、表達(dá)。 結(jié)論： 1、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以促進(jìn)老齡鼠胸腺細(xì)胞生成和增加成熟T細(xì)胞向脾臟的輸出。 2、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以促進(jìn)放療所致小鼠萎縮胸腺的增殖并增加成熟 T細(xì)胞向脾臟的輸出。 3、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以促進(jìn)環(huán)磷酰胺引起小鼠萎縮胸腺的增殖并增加成熟T細(xì)胞向脾臟的輸出。 4、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以促進(jìn)胸腺上皮髓質(zhì)來(lái)源的1C6細(xì)胞和皮質(zhì)來(lái)源的4C18細(xì)胞的增殖，并且1C6細(xì)胞和4C18細(xì)胞中有KGF受