角質(zhì)細胞生長因子對胸腺增殖作用的研究.pdf

1、目的： 1.觀察角質(zhì)細胞生長因子對老齡鼠萎縮胸腺的增殖作用。 2.觀察角質(zhì)細胞生長因子對放療所致萎縮胸腺的增殖作用。 3.觀察角質(zhì)細胞生長因子對環(huán)磷酰胺引起萎縮胸腺的增殖作用。 4.觀察體外培養(yǎng)的情況下，角質(zhì)細胞生長因子對胸腺上皮髓質(zhì)來源1C6細胞和皮質(zhì)來源4C18細胞的增殖作用。 5.檢測胸腺上皮細胞來源1C6和4C18細胞中KGF受體mRNA表達情況。 方法： 1、15個月BA

2、LB/C雄性老齡鼠10只，隨機分為KOF處理組和對照組，每組各5只，連續(xù)7天分別給予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理鹽水，4周后檢測小鼠胸腺和脾臟、淋巴結(jié)的細胞總數(shù)，流式細胞儀分別檢測胸腺組織中CD4單陽性(CD4SP)、CD8單陽性(CDSSP)、CD4CD8雙陽性(DP)、CD4CD8雙陰性(DN)以及脾臟、淋巴結(jié)和外周血中CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的比例。 2、正常BALB/C雄性小鼠15只，隨機

3、分為KGF處理組，對照組和正常組，每組各5只，KGF處理組和對照組均先給予4.5Gy鈷射線照射，24小時后分別連續(xù)7天給予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理鹽水，正常組不經(jīng)過任何處理。4周后檢測小鼠胸腺和脾臟、淋巴結(jié)的細胞總數(shù)，流式細胞儀分別檢測胸腺組織中CD4單陽性(CD4SP)、CD8單陽性(CD8SP)、CD4CD8雙陽性(DP)、CD4CD8雙陰性(DN)以及脾臟、淋巴結(jié)和外周血中CD4SP、CDSSP各T細胞亞

4、群的比例。 3、正常BALB/C雄性小鼠10只，隨機分為KGF處理組和對照組，每組各5只，KGF處理組和對照組均先腹腔注射環(huán)磷酰胺(300 mg/kg)3天，24小時后再分別連續(xù)7天給予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理鹽水。2周后檢測小鼠胸腺和脾臟、淋巴結(jié)的細胞總數(shù)，流式細胞儀分別檢測胸腺組織中CD4單陽性(CD4SP)、CD8單陽性(CDSSP)、CD4CD8雙陽性(DP)、CD4CD8雙陰性(DN)以及脾臟

5、、淋巴結(jié)和外周血中CD4SP、CDSSP各T細胞亞群的比例。 4、體外實驗：鼠胸腺上皮髓質(zhì)來源1C6細胞和皮質(zhì)來源4C18細胞，分別經(jīng)含不同濃度(25、50、100、200、400、800 ng/ml)的KGF和不含KGF的完全培養(yǎng)液(對照組)作用48小時和72小時，采用噻唑藍(MTT)法分析細胞增殖活性。 5、RT-PCR技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳實驗檢測胸腺上皮髓質(zhì)來源的1C6細胞和皮質(zhì)來源的4C18細胞中KGF受體mRN

6、A表達情況。 結(jié)果： 1、在老齡鼠的實驗中，細胞計數(shù)和流式細胞儀檢測顯示，與對照組相比，KGF處理組平均胸腺細胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T細胞亞群的平均細胞數(shù)以及KGF處理組平均脾細胞總數(shù)和CD4SP、CDSSP各T細胞亞群的平均細胞數(shù)均有明顯增加(均P<0.05)，但是KGF處理組淋巴結(jié)平均細胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的平均細胞數(shù)以及外周血中CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的比例沒有

7、顯著變化。 2、放療處理實驗中，細胞計數(shù)和流式細胞儀檢測顯示，與對照組相比，KGF處理組平均胸腺細胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T細胞亞群的平均細胞數(shù)以及KGF處理組平均脾細胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的平均細胞數(shù)均有明顯增加(均P<0.05)，但是KGF處理組淋巴結(jié)平均細胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的平均細胞數(shù)以及外周血中CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的比例沒有顯著變化。與正常組相

8、比，KGF處理組各值均沒有顯著變化。 3、環(huán)磷酰胺處理實驗中，細胞計數(shù)和流式細胞儀檢測顯示，與對照組相比，KGF處理組平均胸腺細胞總數(shù)和CD4SP、CDSSP、DP、DN各T細胞亞群的平均細胞數(shù)以及KGF處理組平均脾細胞總數(shù)和CD4SP、CD8SP各T細胞亞群的平均細胞數(shù)均有明顯增加(均P<0.05)，但是KGF處理組淋巴結(jié)平均細胞總數(shù)和CD4SP、CDSSP各T細胞亞群的平均細胞數(shù)以及外周血中CD4SP、CD8SP各T細胞亞群

9、的比例沒有顯著變化。 4、MTT法檢測顯示，在低濃度(<200 ng/ml)時，1C6細胞增殖率隨KGF濃度的增加不斷升高；當KGF濃度為200 ng/ml時，1C6細胞增殖率達到最高值；而在高濃度(>200 ng/ml)時，1C6細胞增殖率隨KGF濃度的增加又逐漸下降；與對照組比較，濃度為100、200、400ng/ml的KGF對1C6細胞具有明顯的促增殖作用(均P<0.05)。而在低濃度(<100 ng/ml)時，4C18細

10、胞增殖率隨KGF濃度的增加不斷升高；當KGF濃度為100 ng/ml時，4C18細胞增殖率達到最高值；而在高濃度(>100 ng/ml)時，4C18細胞增殖率隨KGF濃度的增加又逐漸下降；與對照組比較，濃度為50、100、200、400 ng/ml的KGF對4C18細胞具有明顯的促增殖作用(均P<0.05)。 5、RT-PCR技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳實驗表明胸腺上皮髓質(zhì)來源的1C6細胞和皮質(zhì)來源的4C18細胞中均有KGF受體mRNA

11、表達。 結(jié)論： 1、角質(zhì)細胞生長因子可以促進老齡鼠胸腺細胞生成和增加成熟T細胞向脾臟的輸出。 2、角質(zhì)細胞生長因子可以促進放療所致小鼠萎縮胸腺的增殖并增加成熟 T細胞向脾臟的輸出。 3、角質(zhì)細胞生長因子可以促進環(huán)磷酰胺引起小鼠萎縮胸腺的增殖并增加成熟T細胞向脾臟的輸出。 4、角質(zhì)細胞生長因子可以促進胸腺上皮髓質(zhì)來源的1C6細胞和皮質(zhì)來源的4C18細胞的增殖，并且1C6細胞和4C18細胞中有KGF受