淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制牙槽骨吸收的作用及機理研究.pdf

1、本文以人牙齦成纖維細胞為實驗模型，檢測淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制LPS對牙齦成纖維細胞的毒性作用，研究LPS刺激GF產(chǎn)生重要的骨吸收因子PGE2的影響，初步篩選其作用濃度，并用正交試驗篩選其最佳組合，采用該組合進行體外和體內(nèi)實驗，觀察其對牙槽骨吸收的影響，并從RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)初步研究其作用機理，為中藥防治牙周炎牙槽骨吸收提供了一定的實驗依據(jù)。主要研究工作如下： 一、淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制骨吸收作用的體外實

2、驗研究。以培養(yǎng)的人牙齦成纖維細胞為實驗模型，用MTT試驗檢測淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制LPS對牙齦成纖維細胞毒性作用的效果，初步篩選其作用濃度；然后用酶聯(lián)免疫法檢測三種提取物對LPS刺激牙齦成纖維細胞產(chǎn)生重要的骨吸收因子PGE2的影響，并用正交試驗篩選其最佳組合， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素均可抑制LPS的作用，三種提取物聯(lián)合作用的效果明顯強于單因素或雙因素組合，其中淫羊藿苷0.01μg/ml、黃芩苷0.01μg/ml、

3、大黃素10μg/ml以1∶1∶1組合效應最大，將該組合作用于體外骨吸收模型，觀察其對骨吸收的影響，結(jié)果顯示其骨吸收陷窩數(shù)目和面積均顯著低于對照組(p＜0.01)。 二、淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素聯(lián)合作用抑制牙周炎牙槽骨吸收的實驗研究。將上述的三種提取物組合作用于大鼠牙周炎模型，通過組織病理學觀察、活性破骨細胞計數(shù)和測定牙槽骨喪失量觀察其對牙槽骨吸收的作用效果，并檢測牙周組織中RANKL和OPGmRNA的表達。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三

4、種提取物聯(lián)合作用可抑制LPS誘導的實驗性牙周炎的形成，實驗組牙槽骨喪失量和活性破骨細胞數(shù)均較少，與空白對照組相比具有顯著性差異(p＜0.05)；空白對照組大鼠牙周組織中RANKL表達上升(p＜0.01)，OPG表達降低(p＜0.05)，RANKL/OPG比值上升(p＜0.01)；實驗組RANKL表達量明顯較空白對照組低(p＜0.05)，雖然OPG表達量與空白對照組相比無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)，但RANKL/OPG比值明顯低于空白對照

5、組(p＜0.05)。 三、淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素對破骨細胞分化的作用。采用RT-PCR、Westernblotting和免疫組化等方法檢測淫羊藿苷對人牙周膜細胞表達OPG以及黃芩苷和大黃素對人牙周膜細胞表達RANKL的影響。結(jié)果表明，淫羊藿苷可促進人牙周膜細胞表達OPGmRNA，黃芩苷和大黃素可抑制IL-1β刺激的人牙周膜細胞RANKL的表達，二者聯(lián)和作用效應更大。將淫羊藿苷0.01μg/ml、黃芩苷0.01μg/ml、大黃素