淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制牙槽骨吸收的作用及機(jī)理研究.pdf

1、本文以人牙齦成纖維細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑱z測(cè)淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制LPS對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞的毒性作用，研究LPS刺激GF產(chǎn)生重要的骨吸收因子PGE2的影響，初步篩選其作用濃度，并用正交試驗(yàn)篩選其最佳組合，采用該組合進(jìn)行體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，觀察其對(duì)牙槽骨吸收的影響，并從RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)初步研究其作用機(jī)理，為中藥防治牙周炎牙槽骨吸收提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要研究工作如下： 一、淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制骨吸收作用的體外實(shí)

2、驗(yàn)研究。以培養(yǎng)的人牙齦成纖維細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，用MTT試驗(yàn)檢測(cè)淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素抑制LPS對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞毒性作用的效果，初步篩選其作用濃度；然后用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)三種提取物對(duì)LPS刺激牙齦成纖維細(xì)胞產(chǎn)生重要的骨吸收因子PGE2的影響，并用正交試驗(yàn)篩選其最佳組合， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素均可抑制LPS的作用，三種提取物聯(lián)合作用的效果明顯強(qiáng)于單因素或雙因素組合，其中淫羊藿苷0.01μg/ml、黃芩苷0.01μg/ml、

3、大黃素10μg/ml以1∶1∶1組合效應(yīng)最大，將該組合作用于體外骨吸收模型，觀察其對(duì)骨吸收的影響，結(jié)果顯示其骨吸收陷窩數(shù)目和面積均顯著低于對(duì)照組(p＜0.01)。 二、淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素聯(lián)合作用抑制牙周炎牙槽骨吸收的實(shí)驗(yàn)研究。將上述的三種提取物組合作用于大鼠牙周炎模型，通過(guò)組織病理學(xué)觀察、活性破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)和測(cè)定牙槽骨喪失量觀察其對(duì)牙槽骨吸收的作用效果，并檢測(cè)牙周組織中RANKL和OPGmRNA的表達(dá)。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三

4、種提取物聯(lián)合作用可抑制LPS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性牙周炎的形成，實(shí)驗(yàn)組牙槽骨喪失量和活性破骨細(xì)胞數(shù)均較少，與空白對(duì)照組相比具有顯著性差異(p＜0.05)；空白對(duì)照組大鼠牙周組織中RANKL表達(dá)上升(p＜0.01)，OPG表達(dá)降低(p＜0.05)，RANKL/OPG比值上升(p＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組RANKL表達(dá)量明顯較空白對(duì)照組低(p＜0.05)，雖然OPG表達(dá)量與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，但RANKL/OPG比值明顯低于空白對(duì)照

5、組(p＜0.05)。 三、淫羊藿苷、黃芩苷和大黃素對(duì)破骨細(xì)胞分化的作用。采用RT-PCR、Westernblotting和免疫組化等方法檢測(cè)淫羊藿苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞表達(dá)OPG以及黃芩苷和大黃素對(duì)人牙周膜細(xì)胞表達(dá)RANKL的影響。結(jié)果表明，淫羊藿苷可促進(jìn)人牙周膜細(xì)胞表達(dá)OPGmRNA，黃芩苷和大黃素可抑制IL-1β刺激的人牙周膜細(xì)胞RANKL的表達(dá)，二者聯(lián)和作用效應(yīng)更大。將淫羊藿苷0.01μg/ml、黃芩苷0.01μg/ml、大黃素