淫羊藿苷、柚皮苷及川續(xù)斷皂苷VI體外促成骨效應(yīng)的比較研究.pdf

1、目的:
　　系統(tǒng)性評(píng)價(jià)及比較三種補(bǔ)腎中藥活性成分淫羊藿苷(Icariin，ICA)、柚皮苷(Naringin,NAR)、川續(xù)斷皂苷Ⅵ(AsperosaponinⅥ，ASAⅥ)對(duì)體外培養(yǎng)原代大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs，簡(jiǎn)稱MSCs)及小鼠前成骨細(xì)胞系MC3T3-E1 Subclone14增殖及成骨性分化的影響。以期為篩選最高效的成骨中藥單體及新藥開發(fā)提供理論

2、依據(jù)。
　　材料和方法:
　　運(yùn)用全細(xì)胞貼壁法體外分離和培養(yǎng)原代大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行鑒定;復(fù)蘇并傳代培養(yǎng)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞。配置濃度為10-3～10-8mol/L的淫羊藿苷、柚皮苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ梯度藥物溶液。首先通過(guò)CCK-8法檢測(cè)各濃度淫羊藿苷、柚皮苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)以上兩種細(xì)胞增殖活性和毒性的影響，篩選每種藥物促增殖作用和毒性作用的濃度范圍，并以每種藥物的最佳促增殖作用藥物濃度進(jìn)行比較，分析藥物促增殖的

3、強(qiáng)弱關(guān)系。隨后用以上篩選得出的三種藥物的無(wú)毒性濃度組干預(yù)兩種細(xì)胞，檢測(cè)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性水平，篩選每種藥物的最佳作用濃度。并將此濃度干預(yù)21天后的細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色、肉眼和鏡下觀察以及礦化能力半定量分析，從而比較淫羊藿苷、柚皮苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ促原代大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和MC3T3-E1細(xì)胞分化和礦化作用的強(qiáng)弱。
　　結(jié)果:
　　一、三種藥物對(duì)于MSCs的影響
　　1、ICA10-6M、NAR10-6M、ASAⅥ10-5

4、M為促進(jìn)MSCs增殖的最佳作用濃度。此三者比較，NAR10-6M對(duì)MSCs增殖的促進(jìn)作用明顯高于ICA10-6M和ASAⅥ10-5M。(P＜0.001)
　　2、高濃度組ICA10-3M、ICA10-4M、NAR10-3M、ASAⅥ10-3M、ASAⅥ10-4M對(duì)MSCs的增殖具有抑制作用。
　　3、ICA10-6M、NAR10-7M、ASAⅥ10-5M為促進(jìn)MSCs堿性磷酸酶活性的最佳濃度。此三者比較，ICA10-6M對(duì)于

5、堿性磷酸酶活性的促進(jìn)作用相對(duì)于ASAⅥ10-5M和NAR10-7M更為明顯(P＜0.05)，說(shuō)明ICA促進(jìn)MSCs堿性磷酸酶活性作用最強(qiáng)。同時(shí)此三者在促進(jìn)MSCs礦化時(shí)，ICA10-6M也顯著優(yōu)于ASAⅥ10-5M（P＜0.05），NAR10-7M最弱（P＜0.01）。
　　二、三種藥物對(duì)于MC3T3-E1細(xì)胞的影響
　　1、ICA10-8M、NAR10-6M、ASAⅥ10-5M為促進(jìn)MC3T3-E1增殖的最佳作用濃度。第三

6、天ASAⅥ10-5M的促增殖作用明顯高于NAR10-6M組(P＜0.05)。第五天時(shí)，三種藥物則無(wú)明顯差異。
　　2、高濃度組ICA10-3M、ICA10-4M、NAR10-3M、NAR10-4M、ASAⅥ10-3M、ASAⅥ10-4M對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖具有抑制作用。
　　3、ICA10-5M、NAR10-8M、ASAⅥ10-5M為促進(jìn)MC3T3-E1堿性磷酸酶活性的最佳濃度。此三者比較ASAⅥ10-5M和ICA1

7、0-5M對(duì)于堿性磷酸酶活性的促進(jìn)作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而NAR10-8M則明顯低于前兩者（P＜0.001），說(shuō)明在作用七天時(shí)ASAⅥ和ICA促進(jìn)堿性磷酸酶活性作用強(qiáng)于NAR。同時(shí)此三者在促進(jìn)MC3T3-E1礦化時(shí)，ICA10-5M和ASAⅥ10-5M無(wú)明顯差別，但兩者明顯優(yōu)于NAR10-8M（P＜0.01和P＜0.05）。因此可判斷，三種藥物中，ICA和ASAⅥ促進(jìn)MC3T3-E1礦化效果作用比NAR強(qiáng)。
　　結(jié)論:
　　1、三

8、種藥物對(duì)兩種細(xì)胞增殖和毒性作用均反映出高濃度抑制增殖低濃度促進(jìn)增殖的趨勢(shì)。
　　2、在促進(jìn)細(xì)胞增殖方面，NAR對(duì)于MSCs細(xì)胞的促進(jìn)作用明顯強(qiáng)于ICA和ASAⅥ。對(duì)于MC3T3-E1細(xì)胞而言，三種藥物促進(jìn)其增殖的整體效果差異不明顯。
　　3、在促進(jìn)細(xì)胞堿性磷酸酶活性及礦化方面，對(duì)于MSCs，ICA的促進(jìn)作用最強(qiáng)，ASAⅥ次之，NAR最弱。對(duì)于MC3T3-E1細(xì)胞而言也得出類似的結(jié)論。
　　4、綜合而言，淫羊藿苷既能夠促