淫羊藿苷、柚皮苷及川續(xù)斷皂苷VI體外促成骨效應的比較研究.pdf

1、目的:
　　系統(tǒng)性評價及比較三種補腎中藥活性成分淫羊藿苷(Icariin，ICA)、柚皮苷(Naringin,NAR)、川續(xù)斷皂苷Ⅵ(AsperosaponinⅥ，ASAⅥ)對體外培養(yǎng)原代大鼠骨髓間充質細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs，簡稱MSCs)及小鼠前成骨細胞系MC3T3-E1 Subclone14增殖及成骨性分化的影響。以期為篩選最高效的成骨中藥單體及新藥開發(fā)提供理論

2、依據(jù)。
　　材料和方法:
　　運用全細胞貼壁法體外分離和培養(yǎng)原代大鼠骨髓間充質干細胞，并對其進行鑒定;復蘇并傳代培養(yǎng)小鼠MC3T3-E1細胞。配置濃度為10-3～10-8mol/L的淫羊藿苷、柚皮苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ梯度藥物溶液。首先通過CCK-8法檢測各濃度淫羊藿苷、柚皮苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ對以上兩種細胞增殖活性和毒性的影響，篩選每種藥物促增殖作用和毒性作用的濃度范圍，并以每種藥物的最佳促增殖作用藥物濃度進行比較，分析藥物促增殖的

3、強弱關系。隨后用以上篩選得出的三種藥物的無毒性濃度組干預兩種細胞，檢測胞內堿性磷酸酶活性水平，篩選每種藥物的最佳作用濃度。并將此濃度干預21天后的細胞進行茜素紅染色、肉眼和鏡下觀察以及礦化能力半定量分析，從而比較淫羊藿苷、柚皮苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ促原代大鼠骨髓間充質干細胞和MC3T3-E1細胞分化和礦化作用的強弱。
　　結果:
　　一、三種藥物對于MSCs的影響
　　1、ICA10-6M、NAR10-6M、ASAⅥ10-5

4、M為促進MSCs增殖的最佳作用濃度。此三者比較，NAR10-6M對MSCs增殖的促進作用明顯高于ICA10-6M和ASAⅥ10-5M。(P＜0.001)
　　2、高濃度組ICA10-3M、ICA10-4M、NAR10-3M、ASAⅥ10-3M、ASAⅥ10-4M對MSCs的增殖具有抑制作用。
　　3、ICA10-6M、NAR10-7M、ASAⅥ10-5M為促進MSCs堿性磷酸酶活性的最佳濃度。此三者比較，ICA10-6M對于

5、堿性磷酸酶活性的促進作用相對于ASAⅥ10-5M和NAR10-7M更為明顯(P＜0.05)，說明ICA促進MSCs堿性磷酸酶活性作用最強。同時此三者在促進MSCs礦化時，ICA10-6M也顯著優(yōu)于ASAⅥ10-5M（P＜0.05），NAR10-7M最弱（P＜0.01）。
　　二、三種藥物對于MC3T3-E1細胞的影響
　　1、ICA10-8M、NAR10-6M、ASAⅥ10-5M為促進MC3T3-E1增殖的最佳作用濃度。第三

6、天ASAⅥ10-5M的促增殖作用明顯高于NAR10-6M組(P＜0.05)。第五天時，三種藥物則無明顯差異。
　　2、高濃度組ICA10-3M、ICA10-4M、NAR10-3M、NAR10-4M、ASAⅥ10-3M、ASAⅥ10-4M對MC3T3-E1細胞的增殖具有抑制作用。
　　3、ICA10-5M、NAR10-8M、ASAⅥ10-5M為促進MC3T3-E1堿性磷酸酶活性的最佳濃度。此三者比較ASAⅥ10-5M和ICA1

7、0-5M對于堿性磷酸酶活性的促進作用無統(tǒng)計學差異，而NAR10-8M則明顯低于前兩者（P＜0.001），說明在作用七天時ASAⅥ和ICA促進堿性磷酸酶活性作用強于NAR。同時此三者在促進MC3T3-E1礦化時，ICA10-5M和ASAⅥ10-5M無明顯差別，但兩者明顯優(yōu)于NAR10-8M（P＜0.01和P＜0.05）。因此可判斷，三種藥物中，ICA和ASAⅥ促進MC3T3-E1礦化效果作用比NAR強。
　　結論:
　　1、三

8、種藥物對兩種細胞增殖和毒性作用均反映出高濃度抑制增殖低濃度促進增殖的趨勢。
　　2、在促進細胞增殖方面，NAR對于MSCs細胞的促進作用明顯強于ICA和ASAⅥ。對于MC3T3-E1細胞而言，三種藥物促進其增殖的整體效果差異不明顯。
　　3、在促進細胞堿性磷酸酶活性及礦化方面，對于MSCs，ICA的促進作用最強，ASAⅥ次之，NAR最弱。對于MC3T3-E1細胞而言也得出類似的結論。
　　4、綜合而言，淫羊藿苷既能夠促