黃酮化合物DH01調(diào)脂抗氧化作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本課題擬從脂代謝和脂質(zhì)過(guò)氧化角度出發(fā)，通過(guò)建立實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥大鼠模型，研究黃酮化合物DH01調(diào)脂抗氧化作用及機(jī)制，并對(duì)其不良反應(yīng)和毒性進(jìn)行初步檢測(cè)，通過(guò)臨床前藥理研究為臨床試驗(yàn)提供參考，為開發(fā)調(diào)脂抗氧化新藥打好基礎(chǔ)。 方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、水飛薊素組(50mg/kg)、阿伐他汀組(5mg/kg)、DH01低劑量組(5.67mg/kg)、DH01中劑量組(17mg/kg)、DH01高劑量組(50mg/kg)

2、，每組10只。(1)采用高脂乳劑灌胃的方法建立高脂血癥大鼠模型。(2)給藥兩周和四周后，酶法測(cè)定血清TC、TG、LDL-c、HDL-c、計(jì)算AI、CHO-R。(3)末次給藥后，取肝稱重，計(jì)算肝指數(shù)，酶法測(cè)定肝臟TC、TG。(4)肉眼及光鏡觀察肝臟形態(tài)學(xué)變化。(5)免疫組化法檢測(cè)肝臟LDLR的表達(dá)水平。(6)ELISA法測(cè)定血清ox-LDL含量、TBA法測(cè)定血清MDA含量、黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清SOD活性、二硫代硝基苯甲酸比色法測(cè)定血清G

3、SH-PX活性。 (7)50mg/kg、150mg/kg劑量灌胃DH01四周后測(cè)定大鼠肝腎功能指標(biāo)，考察藥物對(duì)肝腎功能的影響。(8)最大耐受量實(shí)驗(yàn)：一次性給小鼠灌胃DH01(6g/kg)、大鼠灌胃DH01(4g/kg)，連續(xù)14天觀察動(dòng)物的狀態(tài)及死亡狀況。 結(jié)果：(1)高脂造模一周，模型組大鼠TC、LDL-c顯著升高(p＜0.01)；高脂造模三周，模型組大鼠HDL-c顯著降低(p＜0.01)，TC、LDL-c持續(xù)升高(p

4、＜0.01)。(2)給藥兩周及四周后，與模型組比較，DH01中、高劑量組(17mg/kg、50mg/kg)TC、LDL-c、AI、CHD-R顯著降低，HDL-c顯著升高(p＜0.05或者p＜0.01)；給藥四周后，DH01高劑量組(50mg/kg)TG顯著低于水飛薊素組和模型組(p＜0.01)。(3)給藥四周后，模型組肝臟TC、TG及TI顯著高于正常組(p＜0.05)，DH01高劑量組(50mg/kg)肝臟TG顯著低于模型組(p＜0.0

5、5)；同模型組比較，各給藥組TI均顯著降低(p＜0.05或p＜0.01)。(4)病理學(xué)觀察：正常組大鼠肝小葉清晰可見，肝組織的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)正常；模型組大鼠肝組織出現(xiàn)了彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，肝細(xì)胞變大，胞漿內(nèi)脂滴多為大泡型，細(xì)胞核被擠向細(xì)胞周邊；給藥組肝組織輕度脂肪變性。(5)DH01組(50mg/kg)LDLR表達(dá)明顯高于模型組及水飛薊素組。(6)給藥四周，與模型組比較，DH01組(50mg/kg)血清ox-LDL、MDA含量顯著降低(p

6、＜0.01)，SOD、GSH-PX活性顯著升高(p＜0.01)。(7)連續(xù)給予50mg/kg、150mg/kgDH01四周，大鼠肝功能和腎功能未見異常。(8)急性毒性實(shí)驗(yàn)：小鼠和大鼠14日內(nèi)無(wú)死亡，其體重、血液生化指標(biāo)均正常，主要器官病理學(xué)檢測(cè)未見異常。DH01對(duì)兩種性別小鼠、大鼠的急性毒性經(jīng)口服最大耐受劑量分別大于6g/kg、4g/kg。 結(jié)論：(1)本研究采用高脂乳劑灌胃法成功復(fù)制高膽固醇血癥大鼠模型。(2)DH01能夠降低

7、高膽固醇血癥大鼠TC、LDL-c、AI、CHD-R，升高HDL-c，其效應(yīng)總體上呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴性特征；DH01(50mg/kg)降低TC、LDL-c、AI、CHD-R的效果與等劑量水飛薊素相同；給藥四周后，DH01(50mg/kg)降低TG、升高HDL-c效果優(yōu)于等劑量水飛薊素。(3)初步判定其降低LDL-c的機(jī)制為上調(diào)高脂血癥大鼠肝臟LDLR的表達(dá)，導(dǎo)致肝臟LDLR的數(shù)量和活性升高，血中LDL清除增加。(4)DH01能夠降低肝臟T