高同型半胱氨酸血癥大鼠視網(wǎng)膜ICAM-1表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　 1、建立高同型半胱氨酸血癥大鼠模型。
　　 2、采用免疫組化染色和western blot免疫印跡法研究高同型半胱氨酸血癥大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)ICAM-1的部位和強(qiáng)度，印證高同型半胱氨酸血癥對(duì)視網(wǎng)膜的毒性作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、采用在大鼠每升飲水中添加1.5g L-甲硫氨酸，使大鼠攝入過(guò)量甲硫氨酸，飼養(yǎng)大鼠6周，制造高同型半胱氨酸血癥模型。
　　 2、采用HE染色法觀察高同型半

2、胱氨酸大鼠視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)。
　　 3、應(yīng)用抗ICAM-1抗體免疫組化方法，檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜上ICAM-1的表達(dá)量及其表達(dá)部位。
　　 4、應(yīng)用western blot免疫印跡檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜ICAM-1的表達(dá)量，印證明免疫組化的檢測(cè)結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1、采用在大鼠每升飲水中添加1.5g L-甲硫氨酸，飼養(yǎng)大鼠6周后，采大鼠尾靜脈血檢測(cè)血漿同型半胱氨酸，對(duì)照組血漿Hcy平均濃度為7.0146±2.00

3、μmol/L，模型組為42.9081±12.02μm01/L，對(duì)照組中所有大鼠個(gè)體血漿Hcy濃度均小于15μmol/L，模型組中所有大鼠個(gè)體血漿Hcy濃度均大于15μmol/L，沒(méi)有大鼠從實(shí)驗(yàn)中剔除。兩組大鼠血漿Hcy濃度經(jīng)t檢驗(yàn)，P=0.000，P<0.05，故兩組大鼠血同型半胱氨酸濃度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。顯示造模成功。
　　 2、在HE切片上，對(duì)照組和模型組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯變化。兩組大鼠視網(wǎng)膜均未見(jiàn)出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)

4、、血管閉塞等改變。
　　 3、免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)對(duì)照組OD值為0.284±0.0383；模型組為0.486±0.0329。兩組之間有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4、對(duì)照組平均ICAM-1/β-actin比值為0.35±0.04，模型組為0.49±0.03，兩組大鼠視網(wǎng)膜組織Western blot實(shí)驗(yàn)顯色條帶OD值經(jīng)t檢驗(yàn)，P=0.000，P<0.05，故兩組OD值差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論
　　 1、0.

5、15％濃度的甲硫氨酸飲用水能順利誘導(dǎo)出中度升高的高同型半胱氨酸血癥大鼠，顯示動(dòng)物模型制造成功；
　　 2、用免疫組化和Western bolt免疫印跡法在大鼠視網(wǎng)膜上檢測(cè)到了ICAM-1；
　　 3、高同型半胱氨酸血癥能促進(jìn)大鼠視網(wǎng)膜ICAM-1表達(dá)量上升；
　　 4、在參加實(shí)驗(yàn)的所有動(dòng)物中，未發(fā)現(xiàn)眼底有明顯病變，提示高同型半胱氨酸血癥致病作用的發(fā)生可能還需要更長(zhǎng)的時(shí)間，或同型半胱氨酸需要聯(lián)合其他致病因素才能起作