80株中國大陸新生隱球菌環(huán)境株表型和分子特征的初步研究.pdf

1、研究背景:新生隱球菌所致的感染好發(fā)于細胞免疫功能低下患者，隨著器官移植、骨髓移植等新技術(shù)的發(fā)展以及AIDS患者的增多，隱球菌感染的發(fā)生率也呈逐年明顯上升的趨勢。研究發(fā)現(xiàn)新生隱球菌是隱球菌屬的重要致病菌，屬環(huán)境腐生菌，可從土壤和鴿糞中分離到，并被認為是人和動物最主要的傳染源，主要引起人的腦膜炎和肺炎。隱球菌病，存在顯著的死亡率，但只有稀缺的流行病學(xué)數(shù)據(jù)存在。國內(nèi)的研究大都集中于臨床株，本研究擬對中國大陸新生隱球菌的環(huán)境株的基因型和分子特征

2、進行初步分析，以期進一步了解環(huán)境株與臨床株之間內(nèi)在的關(guān)系。我們試圖進行從中國大陸不同地區(qū)鴿子糞中對隱球菌環(huán)境分離，從隱球菌病的病原特征、毒力、基因型等生物學(xué)特性進行了概述，并對人新生隱球菌病的傳染和流行的基本環(huán)節(jié)、發(fā)病機制、臨床表現(xiàn)、防治等方面的研究進展進行了綜述。力求建立監(jiān)測計劃，以防止感染。
　　 研究目的:本研究旨在了解中國大陸地區(qū)新生隱球菌環(huán)境株的分布情況及其表型和基因型特征。
　　 研究方法:
　　 1

3、.實驗對象:我們采用CACA培養(yǎng)基培養(yǎng)了1372份來自中國大陸東、西、南、北、中大部分地區(qū)私人和公共養(yǎng)鴿場所的鴿糞標本，共分離得到80株新生隱球菌。另有新生隱球菌臨床株及標準株作為對照。
　　 2.實驗方法:
　　 2.1鴿糞中分離新生隱球菌:獲得新生隱球菌環(huán)境株。
　　 2.2新生隱球菌毒性因子:我們意在了解在新生隱球菌毒力表型特征。
　　 2.2.1莢膜:印度墨汁染色。
　　 2.2.2黑色素

4、:隱球菌在含酚混合物的營養(yǎng)基生長并合成黑色素。
　　 2.2.3尿素酶試驗
　　 2.2.437℃生長試驗:影響致病真菌生長的一個最重要的因素是溫度。在體外條件下，隱球菌屬中的其他中很少能在37℃下生長。
　　 2.3.分子生物學(xué)研究:M13-PCR結(jié)合ITS序列分析
　　 2.4.動物毒力試驗
　　 結(jié)果:
　　 新生隱球菌環(huán)境株分離陽性率約5.5％，所有菌株37℃生長良好，有完整的莢膜

5、，尿素酶試驗陽性，ITS序列分析證實它們都屬于血清型A。M13-PCR顯示，它們的基因型為我國及東南亞地區(qū)特征性的VNIc型，顯示了與臨床株的高度一致性。
　　 結(jié)論:中國大陸地區(qū)的隱球菌臨床株與環(huán)境株顯示了高度的同源性，提示對于易感人群，阻斷與相應(yīng)環(huán)境的接觸可有效防止新生隱球菌的感染。
　　 調(diào)查結(jié)果顯示來源于集鴿鴿糞的分離率高于公共廣場?？赡艿脑蚴?，利用各地集鴿時間采集的鴿糞基本來自每戶私人鴿友，其通風(fēng)不良，鴿棚中

6、地面和籠子中堆積的鴿糞也更厚，這些條件可能為新生隱球菌在鴿糞中生長繁殖提供了更為適宜的條件。另外，分離率還與地域相關(guān)，按照北緯200N～500N劃分的3個區(qū)域，鴿群的標本分離率以200N～300N最高(G3，15.25％)，其次為400N～500N(G1，5.45％)，300N～400N(G2，5.1％)最低?？赡艹伺c飼養(yǎng)條件、鴿子的活動習(xí)性、運動遷徙等有關(guān)外，還與氣候條件緊密相關(guān)。提示相應(yīng)的自然環(huán)境（溫帶）更適合該真菌的生存。這些原