中國東南地區(qū)115株新生隱球菌臨床株配型和分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：調(diào)查1993.3-2007.12分離自我國東南地區(qū)115株新生臨床株的基因型組成、配型組成、地域分布等進(jìn)行分析,為我國隱球菌病的預(yù)防、診療提供科學(xué)的依據(jù)。 方法：1.PCR指紋分型：以野生噬菌體M13的小衛(wèi)星核心序列為單引物對(duì)模板DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,參照標(biāo)準(zhǔn)菌株將臨床株鑒定至8種基因型；2.多位點(diǎn)基因序列及系統(tǒng)進(jìn)化學(xué)分析：對(duì)115株新生隱球菌臨床株的ITS和CAP59基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測序、序列分析；CLUSTAL W

2、1.83軟件多重比對(duì)分析ITS序列的差別,MEGA3.1軟件處理數(shù)據(jù)NJ法繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹,bootstrapping法對(duì)系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),區(qū)分新生隱球菌grubii變種、neoformans變種及gattii變種菌株；對(duì)不同血清型隱球菌菌株的CAP59基因序列進(jìn)行比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析,探索區(qū)分新生隱球菌血清型的可行性；利用MLST技術(shù),分析S8012與國外格特菌株的遺傳進(jìn)化關(guān)系；3.根據(jù)Chaturvcdi et al等描述

3、的方法選用特異性引物PCR特異性擴(kuò)增相關(guān)基因：鑒定α和a配型。 結(jié)果：1.分離自東南地區(qū)115株隱球菌臨床株中,88株(76.5％)為VNI基因型菌株；17株(14.8％)為VN Ⅱ基因型菌株；3株(2.6％)為VN Ⅲ基因型菌株；1株(0.87％)為VN Ⅳ基因型菌株；5株(4.3％)為VGⅠ基因型；1株(0.87％)為VGⅡ基因型；2.ITS序列分析可以明確的將各臨床株鑒定至變種水平；CAP59部分基因序列分析不能明確鑒定新

4、生隱球菌血清型；3.國內(nèi)115株隱球菌臨床分離株112株為α配型菌株,占97.4％；1株為α/a配型菌株；2株為α/-配型菌株；4.分離到5株2種基因型新生隱球菌格特變種菌臨床株,見于上海、江蘇南部、浙江北部及廣東省地區(qū)。 結(jié)論：1.分離自中國東南地區(qū)的新生隱球菌臨床株以α配型,VN Ⅰ基因型菌株為主；分離自該地區(qū)AIDS患者的臨床株亦以α,VN Ⅰ基因型菌株為主,但也有α/a,VN Ⅲ基因型菌株；2v中國新生隱球菌臨床株存在一