男性生殖道細菌群落組成與生殖健康的關(guān)系.pdf

1、由于檢測方法的局限,對于定植于男性生殖道中的細菌群落組成情況及其與生殖健康之間的關(guān)系一直存在爭論。在本研究中,我們利用分子微生態(tài)學檢測技術(shù),分別對于正常和患病男性精液以及前列腺液中的細菌群落組成進行研究,并通過比較不同健康狀態(tài)下男性生殖道中的細菌群落組成差異,揭示男性生殖道細菌群落組成與男性生殖健康之間的關(guān)系。
　　在研究的第一部分,我們將19例正常男性和58例不育癥患者作為研究對象,以揭示正常和不育男性生殖道中細菌群落組成情況,

2、并進一步研究精液中細菌群落組成與男性不育之間的關(guān)系。
　　首先,對一部分隨機選取的精液樣本進行革蘭染色,結(jié)果顯示男性精液中普遍存在細菌,且細菌的類型較多,細菌的數(shù)量也多于精子的數(shù)量。然后,對于每個樣本進行基因組DNA抽提,利用針對原核細胞16S rRNA基因V1、V2片段的通用引物對每個樣本進行PCR擴增,并對擴增產(chǎn)物進行焦磷酸測序,通過序列比對來研究樣本中細菌群落組成結(jié)構(gòu)。通過對每個樣本中細菌群落組成進行基于假F的統(tǒng)計學分析,發(fā)

3、現(xiàn)精液中細菌群落組成可以歸為六種類型。利用卡方檢驗和Fisher氏精確性檢測,發(fā)現(xiàn)六種細菌群落組成類型與精液參數(shù)之間沒有相關(guān)性(p＞0.15)。利用比例優(yōu)勢模型對于數(shù)據(jù)進行分析,發(fā)現(xiàn)在所有檢測到的優(yōu)勢細菌中,普氏厭氧球菌與精子質(zhì)量存在負相關(guān)(p=0.0012)。通過本研究,我們發(fā)現(xiàn)存在于精液中的細菌類型與其他作者報道的存在于女性細菌性陰道病患者的生殖道中的類型相似,提示男女性生殖道可能具有一些共有的細菌類型,在某些條件下這些細菌可能會導

4、致不育或生殖道疾病。
　　在研究的第二部分,為了探討慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛綜合征(CP/CPPS)和不育癥患者前列腺液細菌群落組成情況,我們將11例不育男性患者和51例CP/CPPS患者的前列腺液作為研究對象,CP/CPPS患者分為炎癥性CP/CPPS和非炎癥性CP/CPPS兩組類型,26例正常男性的前列腺液作為對照組。
　　首先,對樣本進行全基因組DNA抽提,并利用通用引物以基因組DNA為模板進行PCR擴增,得到16S

5、 rRNA的V3區(qū)基因片段。結(jié)果顯示,患者組前列腺液16S rRNA基因的陽性率高于正常男性(p＜0.01),不同患者組之間前列腺液16S rRNA基因陽性率沒有統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。對于三種不同類型患者前列腺液中的16S rRNA基因進行變性梯度凝膠電泳,并對電泳結(jié)果進行主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS-DA),發(fā)現(xiàn)不同患者組中的細菌群落組成各不相同。有三個條帶在區(qū)分不同疾病組細菌群落組成中起到了重要的作用(p＜