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文檔簡介
1、背景與目的: 細胞凋亡異常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。細胞凋亡分子機制主要是通過蛋白通路調(diào)節(jié)系統(tǒng)來實現(xiàn)的,在細胞凋亡的過程中半胱天冬酶家族(caspases)起著關(guān)鍵作用,而這些凋亡效應(yīng)蛋白受一組凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis,IAPs)的調(diào)控。Smac/DIABLO(以下簡稱Smac)是一種重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白,能解除IAPs對caspase的抑制作用,進而促進細胞凋亡。在多種腫瘤組織中Smac表
2、達顯著降低或缺失,提示其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。PUMA/Bbc3(以下簡稱PUMA)是新近發(fā)現(xiàn)的Bcl—2家族BH—3亞家族中的促凋亡成員,在p53依賴和非依賴途徑的細胞凋亡啟動中發(fā)揮重要的作用。本實驗旨在探討Smac和PUMA在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用和意義,為鼻咽癌的臨床診治和預(yù)后預(yù)測提供依據(jù)。具體內(nèi)容包括研究Smac和PUMA在鼻咽癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系,并從細胞水平探討Smac基因的表達對鼻咽癌細胞凋亡的影響。
3、 方法: 收集130例鼻咽癌和63例鼻咽慢性炎病例,采用免疫組織化學(xué)的方法分別檢測Smac和PUMA的表達,統(tǒng)計分析其表達與臨床病理特征的相關(guān)性。采用TUNEL法檢測鼻咽癌組織的凋亡指數(shù),統(tǒng)計分析Smac和PUMA的表達與鼻咽癌凋亡指數(shù)的相關(guān)性。在培養(yǎng)細胞中觀察高表達Smac對鼻咽癌細胞凋亡的影響。 結(jié)果: 1.Smac和PUMA在鼻咽癌組織中呈低表達 免疫組化結(jié)果顯示Smac陽性表達定位于胞漿。
4、63例鼻咽慢性炎組織中,Smac陽性表達率為95.2%,130例鼻咽癌組織Smac陽性表達率為82.3%。兩組陽性率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.014)。結(jié)果表明鼻咽癌組織中Smac的表達水平顯著低于鼻咽慢性炎組織。 免疫組化結(jié)果顯示PUMA陽性表達定位于胞漿。63例鼻咽慢性炎組織中,PUMA陽性表達率為88.9%,130例鼻咽癌組織PUMA陽性表達率為72.3%。兩組陽性率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.010)。結(jié)果表明鼻咽癌組
5、織中PUMA的表達水平顯著低于鼻咽慢性炎組織。 2.Smac在鼻咽癌病例中的表達與臨床分期和淋巴結(jié)分期呈負相關(guān),與預(yù)后呈正相關(guān) Smac在鼻咽癌病例中表達強度有差異。130例鼻咽癌組織中Smac強陽性病例32例(24.6%),弱陽性病例75例(57.7%),陰性病例23例(17.7%)。Smac的表達與臨床分期(P=0.003)和淋巴結(jié)分期(P=0.008)呈負相關(guān)。結(jié)果提示鼻咽癌組織中Smac的表達水平高低與鼻咽癌臨
6、床發(fā)展進程快慢相關(guān)。 鼻咽癌組織中Smac陽性表達的患者比陰性表達的患者預(yù)后好(P=0.002),且與患者的無瘤生存期呈正相關(guān)(P=0.001)。 3.Smac、PUMA的表達與鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)呈正相關(guān)在130例鼻咽癌患者的石蠟組織中,Smac和PUMA的表達與凋亡指數(shù)的相關(guān)系數(shù)分別為0.237(P=0.037)和0.453(P=0.000)。Smac和PUMA的表達呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.434(P=0.000)。
7、另外,鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)與患者血清中EB—VCA—IgA的滴度呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.240(P=0.034)。 4.體外高表達Smac能促進絲裂霉素誘導(dǎo)的鼻咽癌細胞凋亡在低劑量絲裂霉素誘導(dǎo)作用下,轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1(+)—smac組的HONE-1細胞生存率較pcDNA3.1(+)組的細胞生存率明顯下降。流式細胞術(shù)結(jié)果表明,pcDNA3.1(+)加絲裂霉素組的凋亡率為19.3%,pcDNA3.1(+)—smac加絲裂霉素組
8、的凋亡率為31.2%,組間凋亡率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.009)。結(jié)果提示體外高表達Smac能促進絲裂霉素誘導(dǎo)的鼻咽癌細胞凋亡。 結(jié)論: 1.Smac和PUMA在鼻咽癌組織中呈低表達,Smac的表達與臨床分期和淋巴結(jié)分期呈負相關(guān),并與預(yù)后呈正相關(guān),結(jié)果提示Smac和PUMA低表達是鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展的分子事件。 2.Smac和PUMA的表達與鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)呈正相關(guān),結(jié)果提示Smac和PUMA是鼻咽癌細胞凋亡
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