凋亡相關(guān)分子在鼻咽癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景與目的： 細(xì)胞凋亡異常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。細(xì)胞凋亡分子機(jī)制主要是通過蛋白通路調(diào)節(jié)系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，在細(xì)胞凋亡的過程中半胱天冬酶家族(caspases)起著關(guān)鍵作用，而這些凋亡效應(yīng)蛋白受一組凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis，IAPs)的調(diào)控。Smac/DIABLO(以下簡(jiǎn)稱Smac)是一種重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白，能解除IAPs對(duì)caspase的抑制作用，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在多種腫瘤組織中Smac表

2、達(dá)顯著降低或缺失，提示其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。PUMA/Bbc3(以下簡(jiǎn)稱PUMA)是新近發(fā)現(xiàn)的Bcl—2家族BH—3亞家族中的促凋亡成員，在p53依賴和非依賴途徑的細(xì)胞凋亡啟動(dòng)中發(fā)揮重要的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在探討Smac和PUMA在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用和意義，為鼻咽癌的臨床診治和預(yù)后預(yù)測(cè)提供依據(jù)。具體內(nèi)容包括研究Smac和PUMA在鼻咽癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，并從細(xì)胞水平探討Smac基因的表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響。

3、 方法： 收集130例鼻咽癌和63例鼻咽慢性炎病例，采用免疫組織化學(xué)的方法分別檢測(cè)Smac和PUMA的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析其表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。采用TUNEL法檢測(cè)鼻咽癌組織的凋亡指數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析Smac和PUMA的表達(dá)與鼻咽癌凋亡指數(shù)的相關(guān)性。在培養(yǎng)細(xì)胞中觀察高表達(dá)Smac對(duì)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果： 1.Smac和PUMA在鼻咽癌組織中呈低表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示Smac陽(yáng)性表達(dá)定位于胞漿。

4、63例鼻咽慢性炎組織中，Smac陽(yáng)性表達(dá)率為95.2％，130例鼻咽癌組織Smac陽(yáng)性表達(dá)率為82.3％。兩組陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014)。結(jié)果表明鼻咽癌組織中Smac的表達(dá)水平顯著低于鼻咽慢性炎組織。 免疫組化結(jié)果顯示PUMA陽(yáng)性表達(dá)定位于胞漿。63例鼻咽慢性炎組織中，PUMA陽(yáng)性表達(dá)率為88.9％，130例鼻咽癌組織PUMA陽(yáng)性表達(dá)率為72.3％。兩組陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.010)。結(jié)果表明鼻咽癌組

5、織中PUMA的表達(dá)水平顯著低于鼻咽慢性炎組織。 2.Smac在鼻咽癌病例中的表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)分期呈負(fù)相關(guān)，與預(yù)后呈正相關(guān) Smac在鼻咽癌病例中表達(dá)強(qiáng)度有差異。130例鼻咽癌組織中Smac強(qiáng)陽(yáng)性病例32例(24.6％)，弱陽(yáng)性病例75例(57.7％)，陰性病例23例(17.7％)。Smac的表達(dá)與臨床分期(P=0.003)和淋巴結(jié)分期(P=0.008)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)果提示鼻咽癌組織中Smac的表達(dá)水平高低與鼻咽癌臨

6、床發(fā)展進(jìn)程快慢相關(guān)。 鼻咽癌組織中Smac陽(yáng)性表達(dá)的患者比陰性表達(dá)的患者預(yù)后好(P=0.002)，且與患者的無(wú)瘤生存期呈正相關(guān)(P=0.001)。 3.Smac、PUMA的表達(dá)與鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)呈正相關(guān)在130例鼻咽癌患者的石蠟組織中，Smac和PUMA的表達(dá)與凋亡指數(shù)的相關(guān)系數(shù)分別為0.237(P=0.037)和0.453(P=0.000)。Smac和PUMA的表達(dá)呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.434(P=0.000)。

7、另外，鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)與患者血清中EB—VCA—IgA的滴度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.240(P=0.034)。 4.體外高表達(dá)Smac能促進(jìn)絲裂霉素誘導(dǎo)的鼻咽癌細(xì)胞凋亡在低劑量絲裂霉素誘導(dǎo)作用下，轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1(+)—smac組的HONE-1細(xì)胞生存率較pcDNA3.1(+)組的細(xì)胞生存率明顯下降。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，pcDNA3.1(+)加絲裂霉素組的凋亡率為19.3％，pcDNA3.1(+)—smac加絲裂霉素組

8、的凋亡率為31.2％，組間凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。結(jié)果提示體外高表達(dá)Smac能促進(jìn)絲裂霉素誘導(dǎo)的鼻咽癌細(xì)胞凋亡。 結(jié)論： 1.Smac和PUMA在鼻咽癌組織中呈低表達(dá)，Smac的表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)分期呈負(fù)相關(guān)，并與預(yù)后呈正相關(guān)，結(jié)果提示Smac和PUMA低表達(dá)是鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展的分子事件。 2.Smac和PUMA的表達(dá)與鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)呈正相關(guān)，結(jié)果提示Smac和PUMA是鼻咽癌細(xì)胞凋亡