TRPC1蛋白在鼻咽癌中的表達及其臨床意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　 鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我國常見的頭頸部惡性腫瘤之一，好發(fā)于東南亞地區(qū)及我國南方各省市，在中國南方以及國外的中國南方移民和后裔中發(fā)病率明顯高于歐美等其他地區(qū)25至30倍。目前認為鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多階段、多步驟的復雜過程，與EB病毒感染、遺傳易感性、飲食習慣、環(huán)境污染等有關(guān)。鼻咽癌多發(fā)生于鼻咽部的咽隱窩和頂后壁，解剖位置比較隱蔽，臨床表現(xiàn)復雜且不典型

2、，容易漏診、誤診。因此，約70％的鼻咽癌患者初診時已是局部區(qū)域晚期。
　　 由于鼻咽癌分化程度低，周圍淋巴組織豐富，容易發(fā)生顱內(nèi)外和頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。放射治療是鼻咽癌的首選治療手段，但在單純放療后局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移率很高，放療后的五年生存率仍徘徊在50％左右。因此，為了提高鼻咽癌患者的診療水平，迫切需要尋找鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展和預后相關(guān)的分子標志物及新的靶點。
　　 瞬時受時電位(transientreceptorpotent

3、ial，TRP)是位于細胞膜上的一類非電壓依賴性的陽離子通道。在1969年Cosens和Manning在研究果蠅光感受器TRP突變體時發(fā)現(xiàn):突變體果蠅對持續(xù)的光刺激不產(chǎn)生持續(xù)的峰電位，而是產(chǎn)生瞬時的去極化電位。與其他陽離子通道結(jié)構(gòu)相似，TRP通道也具有6個跨膜拓撲結(jié)構(gòu)(S1～S6)，其N末端和C末端位于細胞內(nèi)，且在第5個和第6個跨膜域間有一個離子通道孔區(qū)域。根據(jù)TRP通道的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)同源性，可將哺乳動物的TRP超家族分為六個亞家族

4、:TRPC(Canonical)、TRPM(Melastatin)、TRPV(Vanilloid)、TRPA(Ankyrintransmembraneprotein)、TRPP(Polycystin)、TRPML(Mucolipin)。
　　 TRPC1是第一個被克隆的哺乳動物TRP通道，與果蠅TRP有34％左右的同源性，全長的人TRPC1蛋白分子量約91kDa，編碼該蛋白的基因位于人3號染色體的q22-q24區(qū)，位于小鼠的9號

5、染色體上。TRPC1蛋白的氨基酸序列在人類、大鼠、小鼠、兔和牛中具有高度保守性。TRPC1蛋白廣泛分布于平滑肌、腦、心臟、睪丸、附睪、卵巢、唾液腺、肝和腎上腺等組織中，主要參與細胞膜受體激活磷脂酶C后所介導的鈣離子進入，被認為是鈣庫操縱性鈣離子通道(SOC)的核心成分，通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)，在細胞增殖、分化、凋亡等起重要作用。
　　 細胞內(nèi)Ca2+的變化是影響細胞生理功能的重要因素，也是多種受體激活后信號轉(zhuǎn)導過程中的關(guān)鍵，

6、而細胞內(nèi)Ca2+變化則依賴于Ca2+跨膜轉(zhuǎn)運和細胞內(nèi)鈣庫釋放和再攝取Ca2+等過程維持動態(tài)平衡。Ca2+穩(wěn)態(tài)在細胞增殖和凋亡、細胞分化、細胞遷移、基因轉(zhuǎn)錄、血管生成、平滑肌收縮、唾液腺及神經(jīng)遞質(zhì)的分泌等生理功能中起重要作用。瞬時受體電位(TRP)通道可以作為細胞膜Ca2+通道調(diào)節(jié)細胞內(nèi)Ca2+濃度，也可以通過改變細胞膜極性，調(diào)節(jié)Ca2+驅(qū)動力來調(diào)節(jié)細胞內(nèi)Ca2+濃度。而且，TRP通道還可在細胞內(nèi)鈣庫的膜上表達，觸發(fā)細胞的增殖和異常分化，

7、并抑制凋亡，從而導致腫瘤不可控制的擴散和侵犯。TRPC1蛋白作為TRP蛋白一員，參與調(diào)節(jié)細胞內(nèi)Ca2+濃度。當TRPC1基因沉默或者TRPC1蛋白低表達，鈣離子內(nèi)流減少，細胞內(nèi)自由Ca2+濃度降低，反之，TRPC1蛋白過表達，鈣離子內(nèi)流增加，細胞內(nèi)自由Ca2+濃度升高，鈣離子穩(wěn)態(tài)破壞，進而促進細胞的異常分化和增殖。
　　 已有研究發(fā)現(xiàn)TRPC1在哮喘和慢性阻塞性肺病中有重要作用，在增殖的氣道平滑肌細胞中TRPC1表達增加，已經(jīng)被

8、預期成為預防周圍氣道纖維化的潛在的靶標。TRPC1蛋白在大鼠缺血性大腦損傷中表達升高。YassineE(l)Hiani等發(fā)現(xiàn):乳腺癌細胞株MCF-7表達TRPC1蛋白，高細胞外鈣離子[Ca2+]o刺激，促進TRPC1蛋白過表達，促進Ca2+內(nèi)流，ERK1/2磷酸化，激活了依賴鈣離子感受器(CaR)的在細胞增殖途經(jīng)，從而導致細胞的異常增殖，MCF-7細胞經(jīng)2-APB、SKF-96365和siRNA技術(shù)處理后，TRPC1表達下調(diào)或者功能抑制

9、，CaR產(chǎn)生的細胞Ca2+內(nèi)流被抑制，細胞增殖被抑制。這個研究結(jié)果表明Ca2+內(nèi)流需要TRPC1，TRPC1在維持[Ca2+]i和細胞增殖過程中起重要作用。BenjaminBeck等認為TRPC1和TRPC4蛋白在角化細胞的Ca2+的平衡和細胞分化中起重要作用，基底癌細胞可能缺乏這兩種蛋白而導致分化障礙。TRPC1蛋白及mRNA在人前列腺癌LNCaP細胞表達，參與調(diào)節(jié)Ca2+內(nèi)流。VandenAbeele等發(fā)現(xiàn)TRPC1、TRPV6可能

10、構(gòu)成前列腺癌細胞的SOCs，當前列腺癌細胞向雄激素抵抗表型轉(zhuǎn)化時，這兩個蛋白表達降低。ValerieC.Bomben等研究發(fā)現(xiàn)TRPC1在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的遷移中起重要作用。TRPC1蛋白的破壞，導致神經(jīng)瘤細胞不全分裂，細胞增殖減慢。
　　 因目前尚無TRPC1蛋白在腫瘤組織中的表達的研究，本研究擬利用組織芯片技術(shù)及免疫組化技術(shù)檢測TRPC1蛋白在人體常見腫瘤組織及其癌旁組織中的表達;檢測鼻咽癌組織和鼻咽慢性炎癥組織中TRPC1

11、蛋白的表達，分析其與鼻咽癌患者臨床特征的關(guān)系，同時，結(jié)合臨床隨訪資料回顧性的分析TRPC1蛋白表達與鼻咽癌患者總生存期(OS)的關(guān)系，為鼻咽癌診斷、預后預測和腫瘤治療提供初步的理論基礎(chǔ)。
　　 研究方法：
　　 1.TRPC1蛋白在人體常見惡性腫瘤組織及癌旁組織中的分布及表達
　　 應(yīng)用組織芯片技術(shù)及免疫組織化學方法檢測TRPC1蛋白在人體常見腫瘤組織及癌旁正常組織中的分布及表達。
　　 2.TRPC1蛋

12、白在鼻咽癌和慢性炎癥組織中的表達及臨床意義
　　 應(yīng)用免疫組織化學方法檢測TRPC1蛋白在24例鼻咽慢性炎癥和138例鼻咽癌組織中的表達情況;分析TRPC1蛋白表達水平與鼻咽癌各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系;分析TRPC1蛋白表達及各臨床病理參數(shù)與鼻咽癌總生存期的關(guān)系;建立COX回歸模型，對各項指標與生存期的關(guān)系進行統(tǒng)計學分析。
　　 3.統(tǒng)計學方法:
　　 采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用x2檢驗比較鼻咽癌

13、組織及鼻咽慢性炎癥組織中TRPC1蛋白的表達率;采用Wilcoxon秩和檢驗對鼻咽癌組織及鼻咽慢性炎癥組織間TRPC1蛋白的表達強度進行統(tǒng)計學分析，采用x2檢驗對TRPC1蛋白表達與鼻咽癌患者的性別、年齡、病理類型、血清EBV-IgG狀態(tài)、有無顱底侵犯、T分期、N分期及TNM分期等臨床病理參數(shù)的關(guān)系進行統(tǒng)計學分析，采用Kaplan-Meier法對TRPC1蛋白表達及各臨床病理參數(shù)與鼻咽癌患者的OS關(guān)系進行統(tǒng)計學分析;建立COX回歸模型，

14、對各項指標與總生存時間的關(guān)系進行統(tǒng)計學分析。以雙側(cè)P＜0.05認為具有統(tǒng)計學差異。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.TRPC1蛋白在人體常見腫瘤組織及癌旁正常組織中的分布和表達情況
　　 TRPC1蛋白廣泛表達于乳腺、食管、胃腸、肝、肺臟、咽、喉、胰腺等癌旁正常組織中，并在相應(yīng)的腫瘤組織中也有表達。其中，TRPC1蛋白在乳腺非浸潤性導管癌、食管鱗癌、直腸腺癌、肝細胞肝癌、腎透明細胞癌、卵巢漿液性囊腺癌、咽鱗癌、喉鱗癌

15、、鼻咽癌等腫瘤組織中高表達，在結(jié)腸腺癌、肺鱗癌、胃癌、前列腺癌組織中中度表達，在宮頸癌和胰腺癌中低表達。
　　 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌及鼻咽組織慢性炎癥中的表達
　　 TRPC1蛋白主要表達于細胞的胞漿。在138例鼻咽癌組織中，TRPC1蛋白表達總的陽性表達率為84.1％(116/138)。在116例陽性表達癌組織中，(+)44例，(++)44例，（+++）28例，高表達率為52.2％。而在24例鼻咽慢性炎癥組織中，

16、6例無TRPC1蛋白表達，TRPC1蛋白陽性表達率為75.0％(18/24)，其中(+)13例，（++）3例，（+++）2例，高表達率為20.8％。鼻咽癌組織TRPC1蛋白的高表達率(52.2％)顯著高于鼻咽慢性炎癥組織(20.8％)(P＜0.05)。鼻咽癌組織TRPC1蛋白的表達強度顯著高于鼻咽慢性炎癥組織。
　　 3.TRPC1蛋白在鼻咽癌組織中的臨床意義
　　 TRPC1蛋白表達與鼻咽癌患者的性別、年齡、組織病理學

17、類型、血清EBV-IgG狀態(tài)無關(guān)(P值分別為:0.155，0.423，0.647，0.811)，與患者有無顱底侵犯、T分期、N分期、TNM分期有關(guān)(p值分別為:0.001，0.004，0.049，0.013)。隨訪發(fā)現(xiàn)TRPC1蛋白高表達的鼻咽癌患者中位生存時間為50.0個月，而TRPC1蛋白低表達者中位生存時間為86.0月。TRPC1蛋白高表達的鼻咽癌患者中位生存期顯著低于TRPC1蛋白低表達者（P=0.000）。將TRPC1蛋白表達

18、及鼻咽癌患者各臨床病理參數(shù)與鼻咽癌患者總生存期的關(guān)系進行統(tǒng)計學分析，結(jié)果顯示性別、年齡、血清EBV-IgG狀態(tài)、組織病理學分型不影響鼻咽癌患者的總生存時間(P值分別為:0.417，0.401，0.785，0.837)，而TRPC1蛋白表達、顱底侵犯、T分期、N分期和TNM分期是影響鼻咽癌患者生存的因素（p值均＜0.05）。COX比例風險模型分析發(fā)現(xiàn)TRPC1蛋白表達、N分期、顱底侵犯是影響鼻咽癌患者總生存時間的獨立危險因素(p值均小于0

19、.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.TRPC1蛋白人體常見腫瘤及癌旁正常組織中廣泛表達，并在多種類型腫瘤組織中表達上調(diào)，提示TRPC1腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有特殊的意義，值得進一步探討;
　　 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌組織中高表達，而在鼻咽慢性炎癥組織中低表達，提示TRPC1有可能作為對鼻咽癌診斷及鑒別診斷有參考價值的生物標志物;
　　 3.TRPC1蛋白在與顱底侵犯、T分期、N分期、TNM分期相關(guān)，TR