鼻咽癌中β-catenin的表達與鼻咽癌細胞增殖、凋亡及侵襲的關系.pdf

1、背景：
　　 鼻咽癌是我國南方最常見的惡性腫瘤之一，素有“廣東瘤”之稱。據(jù)世界衛(wèi)生組織的粗略估計，全球80％左右的鼻咽癌發(fā)生在我國。鼻咽癌的病因及其發(fā)病機制迄今尚未完全明了，但可以肯定地說，鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展與遺傳、環(huán)境和Epstein-Barr(EB)病毒感染等多因素有關。連環(huán)蛋白(catenin)與鈣粘蛋白(cadherin)是介導細胞與細胞之間粘附的重要分子，catenin包括α、β、γ三種。β-catenin同時也是Wn

2、t信號通路的重要成員。Wnt信號通路在調節(jié)細胞發(fā)育、分化中具有重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)人類許多腫瘤如結直腸癌、肺癌和乳腺癌細胞和組織中出現(xiàn)Wnt信號通路的異常激活。我們前期研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織中EB病毒編碼的重要癌基因——潛伏膜蛋白1(latent membrane protein1，LMP1)與β-catenin的異常表達存在明顯的正相關，同時發(fā)現(xiàn)LMP1可提高鼻咽癌細胞株β-catenin的核聚集及上調β-catenin的轉錄活性，且

3、這種改變與鼻咽癌細胞株不同分化程度有關。由此，LMP1除了通過NF-κB、AP-1和STAT信號通路外，還可能通過Wnt/β-catenin信號通路在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起作用。但β-catenin究竟在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中起何作用?β-catenin的表達與鼻咽癌細胞的增殖、凋亡和侵襲等生物學行為關系如何?β-catenin能否成為鼻咽癌治療的新靶點?研究這些問題對理解鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展機制和臨床針對鼻咽癌的治療具有重要的理論和應用價值。<

4、br>　　 目的：
　　 探討鼻咽癌組織中β-catenin的表達與鼻咽癌細胞增殖、凋亡和侵襲等生物學行為的關系，以期為鼻咽癌的基因治療找到新的靶點。
　　 方法：
　　 1.Western blot檢測并比較不同分化程度的鼻咽癌細胞株CNE1(高分化)和CNE2(低分化)中β-catenin、caspase3、PARP、MMP2、MMP9、c-Myc、cyclin D1蛋白的表達；
　　 2.West

5、ern blot檢測鼻咽新鮮組織(包括1例鼻咽粘膜慢性炎與5例鼻咽癌)中β-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表達情況；
　　 3.免疫組化檢測78例鼻咽癌組織中β-catenin、細胞增殖指標Ki-67和細胞凋亡指標caspase3的表達并探討β-catenin表達與增殖、凋亡指標的相關性；
　　 4.采用Lipofectamine2000將β-catenin SiRNA瞬時轉染至不同分化程度的鼻咽癌細胞株CNE

6、1和CNE2，Western blot檢測β-catenin表達下調后不同時間鼻咽癌細胞MMP2、MMP9、Cyclin D1、c-Myc的表達及流式細胞儀檢測細胞凋亡和MTT檢測細胞增殖情況。
　　 結果：
　　 1.Western-blot檢測不同分化程度鼻咽癌細胞株CNE1和CNE2中β-catenin的表達，結果顯示CNE1和CNE2的β-catenin蛋白表達水平無明顯差異。另外，MMP2、MMP9、c-Myc

7、及cyclin D1蛋白表達水平在高分化鼻咽癌細胞株CNE1低于低分化鼻咽癌細胞株CNE2。而細胞凋亡指標caspase3和PARP的蛋白表達水平在高分化鼻咽癌細胞株CNE1高于低分化鼻咽癌細胞株CNE2。
　　 2.Western-blot檢測鼻咽癌(5例)和鼻咽粘膜慢性炎(1例)新鮮組織中β-catenin、MMP2和MMP9的蛋白表達，結果顯示5例鼻咽癌新鮮組織中均有β-catenin表達，且其中3例β-catenin呈明

8、顯高表達；MMP-2在4例鼻咽癌新鮮組織中有表達，且表達量不一致；MMP-9在5例鼻咽癌新鮮組織中均有明顯表達；而鼻咽粘膜慢性炎新鮮組織(1例)中均未檢測到β-catenin、MMP2和MMP9的表達。
　　 3.免疫組化結果顯示β-catenin在鼻咽癌組織中異常表達(陽性信號定位于細胞膜＜70％或＞10％出現(xiàn)細胞漿或/和細胞核著色)率占76.9％(60/78)；caspase3陽性表達率為30.8％(24/78)；Ki-67

9、的陽性表達率范圍為1％～64％，其中Ki-67陽性表達率大于20％為38例(38/78)。β-atenin的異常表達與caspase3表達存在明顯負相關(r=-0.637，P＜0.05)；在Ki-67陽性表達率＞20％的組織中β-catenin與Ki-67的表達率呈明顯正相關(r=0.714，P＜0.05)。
　　 4.將β-catenin SiRNA瞬時轉染進不同分化程度的鼻咽癌細胞株CNE1和CNE2，與對照組比較，β-ca

10、tenin SiRNA轉染組β-catenin蛋白表達水平明顯降低。其下游基因cyclinD1和c-Myc表達亦明顯降低，且呈時間依賴性；另外，細胞侵襲指標MMP2和MMP9的蛋白表達在β-catenin SiRNA轉染組也明顯下降，并呈時間依賴性。MTT檢測結果顯示與對照組比較，β-catenin SiRNA轉染組鼻咽癌細胞增殖明顯減低。流式細胞分析結果顯示β-catenin SiRNA轉染組鼻咽癌細胞凋亡亦明顯增加，且呈時間依賴性。

11、
　　 結論：
　　 1.鼻咽癌組織中存在β-catenin的異常表達且與高增殖指數(shù)呈正相關，與凋亡指標呈負相關；與鼻咽粘膜慢性炎比較，鼻咽癌組織中存在β-catenin、MMP2和MMP9蛋白的高表達，可能與癌細胞的惡性生物學行為有關；
　　 2.低分化鼻咽癌細胞株CNE2的cyclinD1、c-Myc、MMP2和MMP9表達高于高分化鼻咽癌細胞株CNE1，而caspase3、PARP表達低于CNE1，說明不同