細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)因子在HAM-TSP中的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景:HTLV-1感染與急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病HAM/TSP密切相關(guān),HAM/TSP是一組慢性神經(jīng)脊髓病變的臨床實(shí)體,多侵犯胸髓中下段。個(gè)體感染HTLV-1后,經(jīng)長(zhǎng)短不一的潛伏期,只有少部分發(fā)展為HAM/TSP,其發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。據(jù)報(bào)道,直接感染并不是關(guān)鍵,HAM/TSP患者體內(nèi)出現(xiàn)強(qiáng)烈的體液和細(xì)胞抗病毒免疫反應(yīng),而且其中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活動(dòng)性損傷中出現(xiàn)凋亡的CD4+、CD8+和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),凋亡參與了HTLV-1

2、感染淋巴細(xì)胞的清除,可能在其發(fā)病機(jī)制中起重要作用。近年來(lái),關(guān)于細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)基因在HAM/TSP發(fā)生發(fā)展中的作用引起了國(guó)際學(xué)者的廣泛關(guān)注和研究。目前,國(guó)內(nèi)在這方面的認(rèn)識(shí)及有關(guān)資料的報(bào)道仍十分罕見,尤其是關(guān)于發(fā)病機(jī)制的研究與國(guó)際研究進(jìn)展的差距較大。汕頭地區(qū)位于粵東的太平洋沿岸,符合本病地理分布區(qū)域范圍,我們以往的研究,也證明汕頭為HTLV-1流行區(qū),存在HAM/TSP患者。為進(jìn)一步了解掌握HAM/TSP病的發(fā)病機(jī)制及病程的發(fā)展、取向和

3、轉(zhuǎn)歸,探討凋亡及其相關(guān)因子在HAM/TSP發(fā)生發(fā)展中的作用,我們?cè)谠械幕A(chǔ)上開展了本課題的研究。
　　目的:1)研究HAM/TSP外周血淋巴細(xì)胞凋亡情況;2)研究HAM/TSP患者血漿及腦脊液中可溶性Fas(sFas)和Fas配體(sFasL)表達(dá)水平及其與HAM/TSP病發(fā)病機(jī)制的關(guān)系;3)研究凋亡相關(guān)基因Fas、TNF-a和Bcl-2蛋白在HAM/TSP發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　材料與方法:8例HAM/TSP患者來(lái)自汕大

4、醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)科的住院患者,均符合Osame診斷標(biāo)準(zhǔn),取患者肝素抗凝血2ml,腦脊液2ml,外周血分離出血漿和淋巴細(xì)胞,腦脊液2000rpm離心10min,留取上清,于-20℃保存,待測(cè)。應(yīng)用單細(xì)胞電泳(彗星電泳)檢測(cè) HAM/TSP患者外周血淋巴細(xì)胞的凋亡情況,每份標(biāo)本隨機(jī)抽取100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量,尾部DNA占總DNA90％以上的細(xì)胞為凋亡細(xì)胞;應(yīng)用ELISA檢測(cè)8例HAM/TSP患者血漿和腦脊液中sFas、sFasL的表達(dá)水

5、平。用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)患者外周血淋巴細(xì)胞上Fas、TNF-a和Bcl-2蛋白進(jìn)行定量檢測(cè),結(jié)果用軟件包WinMDI version2.9分析平均熒光強(qiáng)度。
　　結(jié)果:
　　單細(xì)胞電泳HAM/TSP組為13.63±0.48%,對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞凋亡率為1.63±0.57%,兩組比較有顯著性差異,P<0.05。
　　ELISA檢測(cè)HAM/TSP患者血漿sFas表達(dá)水平(1.08±0.26ng/ml)與OIND(0.29±0.

6、05ng/ml)及正常對(duì)照組(0.18±0.07ng/ml)相比顯著增高(P<0.05);血漿sFasL(0.26±0.11ng/ml)表達(dá)水平與OIND(0.22±0.04ng/ml)及正常對(duì)照組(0.21±0.05ng/ml)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);腦脊液sFas與sFasL表達(dá)水平(0.19±0.07、0.24±0.08ng/ml)均高于OIND組(0.11±0.06、0.01±0.01ng/ml)(P<0.05)。

7、r>　　流式細(xì)胞儀檢測(cè)HAM/TSP外周血淋巴細(xì)胞中Fas、TNF-a(180.15±105.23、60.28±25.21)表達(dá)水平顯著高于OIND組(41.50±21.72、20.18±3.08)及對(duì)照組(37.02±17.26、17.60±1.50)(P<0.05)。而Bcl-2(23.50±8.44)呈低表達(dá),與OIND組(34.84±9.63)比較差異有顯著性(P<0.05)。與對(duì)照組(27.39±8.78)相比差異無(wú)顯著性(P

8、>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1)患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡增多,淋巴細(xì)胞處于活化狀態(tài),自身免疫功能異常,淋巴細(xì)胞凋亡可能在HAM/TSP的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
　　2)HAM/TSP患者血漿和腦脊液中激活的T細(xì)胞、HTLV-1感染細(xì)胞(包括T細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)原)存在由Fas介導(dǎo)的凋亡;sFasL表達(dá)水平增高,尤其是亞急性期患者腦脊液中sFasL顯著增高,是導(dǎo)致HAM/TSP惡化的一個(gè)重要因素,Fas/FasL