p63基因在鼻咽癌中的表達(dá)及其分子機(jī)理的相關(guān)研究.pdf

1、鼻咽癌是一種在中國南方，東南亞及北非一些國家中高發(fā)的上皮惡性腫瘤。鼻咽癌的病因被認(rèn)為與遺傳易感性、EB病毒感染以及其他一些環(huán)境因素密切相關(guān)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的分型標(biāo)準(zhǔn)可將鼻咽癌分為角化性鱗狀細(xì)胞癌、分化型非角化性癌以及未分化型非角化性癌。在鼻咽癌高發(fā)地區(qū)——中國南方，90％的鼻咽癌患者均為未分化型非角化性癌，且?guī)缀跛形捶只头墙腔员茄拾┗颊呔鶖y帶有EB病毒感染。 p63是一個(gè)與p53有著高度同源性的p53家族新成員

2、，它與p53有著結(jié)構(gòu)與功能上的相似性，同時(shí)也有許多不同之處。p63對于上皮細(xì)胞的發(fā)育和分化非常重要，同時(shí)，在許多腫瘤中都觀察到p63的高表達(dá)，尤其是那些分化程度低的惡性腫瘤。本研究的主要目的即為檢測p63在鼻咽癌中的表達(dá)并進(jìn)一步對引起其高表達(dá)的機(jī)理進(jìn)行探索。 本論文首先通過免疫組化在一張有248例鼻咽標(biāo)本的組織芯片上研究了p63在鼻咽癌及鼻咽部非癌組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)p63在202例未分化非角化性鼻咽癌組織中100％呈陽性表達(dá)

3、，而在29例鼻咽炎癥組織及17例鼻咽癌旁上皮組織中為陰性表達(dá)。為了進(jìn)一步明確p63表達(dá)與鼻咽癌不同分化程度之間的關(guān)系，我們分析了106例不同分化類型的鼻咽癌組織，其中有8例角化性鼻咽癌，48例分化型非角化性鼻咽癌和50例未分化型非角化性鼻咽癌。p63在所有的鼻咽癌標(biāo)本都為陽性表達(dá)，且p63陽性表達(dá)的強(qiáng)度與鼻咽癌的分化程度密切相關(guān)。p63在角化性鼻咽癌、分化型非角化性鼻咽癌及未分化型非角化性鼻咽癌中的強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為62.5％(5/8)

4、、92.5％(43/48)、及100％(50/50)。在角化性鼻咽癌及非角化性鼻咽癌中存在顯著性差異(p=0.001)。 在明確了p63在鼻咽癌中呈陽性表達(dá)以及其表達(dá)強(qiáng)度與鼻咽癌分化程度密切相關(guān)之后，我們對其高表達(dá)的分子機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步的探討。首先，我們對p63基因進(jìn)行了突變分析，看其是否因?yàn)榛蛲蛔儐适Щ钚?，?dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，聚集在核內(nèi)而呈現(xiàn)出高表達(dá)。由于鼻咽組織的復(fù)雜性，我們對鼻咽癌組織標(biāo)本采取了克隆測序的策略。而對其

5、匹配的血標(biāo)本采取PCR直接測序的方法。通過對p63基因14個(gè)外顯子的測序，我們均未發(fā)現(xiàn)其在鼻咽癌中有突變發(fā)生，說明p63在鼻咽癌中的高表達(dá)并非由其基因突變所導(dǎo)致。 p63基因在鼻咽癌中沒有發(fā)生突變，說明p63的高表達(dá)可能另有原因。在以往的研究中，人們發(fā)現(xiàn)p53蛋白在一些腫瘤中可能因?yàn)榕c病毒編碼的蛋白質(zhì)相互作用而導(dǎo)致活性喪失，從而導(dǎo)致p53呈現(xiàn)出高表達(dá)。另一方面，EB病毒感染被證實(shí)與鼻咽癌的發(fā)生有著密切聯(lián)系。而有報(bào)道稱EBNA-5

6、與p53能在細(xì)胞核內(nèi)發(fā)生相互作用。因此，我們對p63和ENBNA-5進(jìn)行了免疫共沉淀試驗(yàn)，證實(shí)了二者在鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)能相互結(jié)合。同時(shí)，我們對攜帶有EBV及未攜帶EBV的細(xì)胞株進(jìn)行了半衰期分析，發(fā)現(xiàn)有EBV的細(xì)胞株中p63的半衰期明顯高于沒有EBV的細(xì)胞株，說明p63與EBNA-5的結(jié)合可能是導(dǎo)致p63在鼻咽癌中呈現(xiàn)高表達(dá)的原因。 此外，我們還用半定量RT-PCR對p63不同異構(gòu)體在鼻咽癌中的表達(dá)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)TA-和△N-型p6

7、3這兩大類異構(gòu)體在mRNA水平上均有表達(dá)，但△Np63的表達(dá)占主導(dǎo)地位。我們還應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀方法(chromatinimmunoprecipitationassay，ChIP)對p63下游因子進(jìn)行了分析。ChIP結(jié)果表明p63作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，能與p21以及14-3-3σ的啟動子區(qū)域結(jié)合，從而對其起到一定的調(diào)控作用。 本研究觀察到p63在鼻咽癌中有高度表達(dá)，且其表達(dá)強(qiáng)度與鼻咽癌分化程度密切相關(guān)。免疫共沉淀試驗(yàn)證實(shí)p63能在