噻蟲胺在小白菜中的殘留測定及其生物標(biāo)志物的研究.pdf

1、研究目的： 噻蟲胺（clothianidin）是第二代新型煙堿類廣譜內(nèi)吸殺蟲劑，主要通過作用于昆蟲神經(jīng)細胞上的乙酰膽堿型受體，使神經(jīng)體持續(xù)激活，蟲體持續(xù)痙攣，麻痹死亡。與第一代相比，其分子結(jié)構(gòu)的主要差別為：氯代噻唑基團取代了吡啶基團；硝基亞胺取代了硝基亞甲基部分，這一改變使得其殺蟲活性更高，殺蟲譜更廣。少量的噻蟲胺殘留不會對人體造成立即的、直接的毒害，但長期食用受其污染的蔬菜可導(dǎo)致癌癥、內(nèi)分泌紊亂等疾病。本研究意在建立一種簡便、

2、快速、高效的噻蟲胺殘留檢測方法，并尋找一種或多種比較敏感的生物標(biāo)記物，作為噻蟲胺污染蔬菜的早期診斷指標(biāo)。 研究方法： 1．田間試驗：田間試驗小區(qū)面積20㎡，兩種施藥劑量（按有效成份計）分別為50g/h㎡（推薦量）和200g/h㎡，當(dāng)幼苗長至10cm左右時第一次噴藥，以后每隔2d噴一次，共噴施3次。另設(shè)一空白對照小區(qū)。最后一次施藥后的第0d、1d、3d、5d、7d、10d、12d，用“Z”型法采集健康生長的全株小白菜進行農(nóng)

3、殘及生物標(biāo)志物分析，農(nóng)殘檢測增加了第15d的檢測。實驗每天取樣測定時均設(shè)6個重復(fù)，各取6個重復(fù)的平均值。 2．噻蟲胺殘留測定：采用丙酮提取，硅膠色譜柱凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，高效液相色譜（LC-10Avp，ODS色譜柱）法檢測其農(nóng)藥殘留量。 3．生物標(biāo)志物檢測：過氧化物酶（POD）活性測定采用愈創(chuàng)木酚法，多酚氧化酶（PPO）活性測定采用分光光度法，谷胱甘肽（GSH）含量測定采用Ellman法，丙二醛（MDA）含量測定采用硫

4、代巴比妥酸法，超氧陰離子自由基（（））含量測定采用羥胺氧化反應(yīng)法，可溶性蛋白質(zhì)的含量測定考馬斯亮藍法。 研究結(jié)果： 1．噻蟲胺殘留：動態(tài)噻蟲胺殘留檢測方法的平均加標(biāo)回收率為93．02％～94．4％（n=6），相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3．3％～5．4％（n=6）；殘留消解動態(tài)研究結(jié)果：低濃度處理組的半衰期T1/2為1．61d，殘留動態(tài)方程為CT=28．633e-0．4301T，相關(guān)系數(shù)r=0．9455（n=6）；高濃度處理組的半衰期

5、T1/2為2．05d，殘留動態(tài)方程為CT=85．816e-0．3374T相關(guān)系數(shù)為r=0．9578（n=6），10d后殘留量均低于5．0mg/kg。 2．噻蟲胺脅迫對小白菜蛋白質(zhì)含量的影響：處理組的蛋白質(zhì)含量均明顯低于對照組，濃度越高蛋白質(zhì)含量越低，低濃度組第5d達到最低值，此后逐漸增加，12d左右與對照組基本一致；高濃度組蛋白質(zhì)第1d后開始降低，第7d達到最小值，12d時仍與對照組有顯著性差異。 3．噻蟲胺脅迫對小白菜

6、PPO活性的影響：處理組的PPO活性均于噴灑農(nóng)藥當(dāng)天即開始明顯升高，低濃度組PPO活性于第5d達到最大值，此時，PPO活性為對照組的1．17倍，此后逐漸降低；高濃度組PPO活性于第7d達到最大值，此時PPO活性是對照組的1．4倍，此后呈下降趨勢。 4．噻蟲胺脅迫對小白菜GSH含量的影響：在脅迫初期GSH含量急劇降低，低濃度處理組GSH含量在第5d下降到最低點，高濃度處理組GSH含量在第7d下降到最低點，此后逐漸升高，在第12d左

7、右與對照組GSH含量基本達到一致。 5．噻蟲胺脅迫對小白菜MDA含量的影響：高、低濃度處理組MDA的含量較對照組均顯著增高，且處理濃度越高，組織內(nèi)MDA含量越高，最后一次施藥當(dāng)天，高濃度處理組MDA含量即為對照組的3．3倍，低濃度處理組為對照組的1．8倍，且兩組MDA變化趨勢相同，均為逐漸降低。 6．噻蟲胺脅迫對小白菜POD活性的影響：低濃度處理組POD活性在施藥后第5d達到最高值，而高濃度處理組在第7d達最高值，施藥后

8、的第12d左右，處理組POD活性與對照組POD活性基本趨于一致。 7．噻蟲胺脅迫對小白菜（）含量的影響：（）含量與所遭受農(nóng)藥脅迫的濃度成正相關(guān)，高濃度處理組（）含量在整個實驗期均高于低濃度處理組，并且隨著時間推移含量逐漸降低。低濃度處理組在施用農(nóng)藥前5d（）含量高于對照組，第5d后其含量略低于對照組。 結(jié)論 1．本實驗所采用的前處理及檢測方法簡化了操作步驟、縮短了提取時間和檢測時間，而且能保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性、可