尼可地爾抗心肌肥厚的藥效學(xué)及機(jī)制研究.pdf

1、心肌肥厚作為心力衰竭的前奏，可增加心律失常、心肌梗死及猝死的發(fā)生率，被認(rèn)為是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。尼可地爾(Nicorandil，Nic)是近年來研制開發(fā)的一種兼有鈣拮抗作用的KATP通道開放劑。研究已證實(shí)，Nic除了能增加冠脈血流，減少心肌氧耗外，還可同時(shí)降低心臟的前、后負(fù)荷，且不引起反射性心動(dòng)過速等作用。本研究通過建立不同動(dòng)物心肌肥厚模型，運(yùn)用免疫學(xué)、電生理學(xué)、分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)方法，從氧自由基損傷、能量代謝障礙、細(xì)胞動(dòng)作電位

2、、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞內(nèi)鈣超載及相關(guān)基因表達(dá)諸方面探討Nic對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌肥厚的作用及其機(jī)制，為Nic的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分尼可地爾抗心肌肥厚的藥效學(xué)研究 一、尼可地爾對(duì)異丙腎上腺素誘發(fā)小鼠心肌肥厚的保護(hù)作用 采用連續(xù)多次皮下注射小劑量異丙腎上腺素(isoproterenol，Iso)2mg·kg-1的方法建立小鼠心肌肥厚模型，觀察：Nic對(duì)小鼠心重指數(shù)和組織病理改變的影響；Nic對(duì)常壓密閉缺氧條件下小鼠存活

3、時(shí)間的影響；Nic對(duì)小鼠心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量的影響。結(jié)果顯示：(1)Nic明顯減輕小鼠心重指數(shù)和纖維化病理改變。(2)Nic延長(zhǎng)心肌肥厚小鼠缺氧后存活時(shí)間(P＜0.05或P＜0.01)，增強(qiáng)整體動(dòng)物在缺氧條件下的生存能力。(3)Nic提高肥厚心肌組織中SOD和GSH-Px活性，減少M(fèi)DA含量，其中尤以中、高劑量組效果明顯(P＜0.05或P＜0.01)。 二

4、、尼可地爾對(duì)甲狀腺素誘發(fā)大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用 采用連續(xù)腹腔注射左旋甲狀腺素(L-thyroxine，L-thy)建立大鼠心肌肥厚模型，檢測(cè)Nic對(duì)大鼠心肌線粒體組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Na+，K+-ATPase和Ca2++-ATPase活性的影響，同時(shí)使用KATP通道阻滯劑格列苯脲(glibenclamide，Glib)，觀察其對(duì)Nic作用的影響。研究發(fā)現(xiàn)：Nic能提高心肌線粒體組織中SOD活性，減少M(fèi)

5、DA含量(P＜0.05或P＜0.01)；Nic能增加心肌線粒體組織中Na+，K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性(P＜0.01)。Glib可不同程度地減弱Nic對(duì)心肌線粒體組織的上述作用。 第二部分尼可地爾抗心肌肥厚的機(jī)制研究 一、尼可地爾對(duì)豚鼠心室乳頭狀肌動(dòng)作電位的影響 本節(jié)以豚鼠心室乳頭狀肌為研究對(duì)象，采用標(biāo)準(zhǔn)微電極技術(shù)記錄心肌動(dòng)作電位，研究Nic對(duì)心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的作用。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了在不同濃度條件

6、下，Nic對(duì)乳頭狀肌動(dòng)作電位幅值(actionpotentialamplitude，APA)、動(dòng)作電位時(shí)程(actionpotentialduration，APD)APD50及APD90的影響；沖洗換液后給予一定量的KATP通道阻滯劑Glib后，同樣在上述不同Nic濃度條件下，觀察Nic對(duì)AP作用的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Nic可濃度依賴性的縮短動(dòng)作電位的APD50及APD90，其中對(duì)APD90的影響尤為顯著(P＜0.01)，對(duì)APA無顯著作用

7、(P＞0.05)；當(dāng)加入Glib后，心室乳頭狀肌細(xì)胞動(dòng)作電位APD50和APD90的縮短率均顯著減小(P＜0.01)，這表明Glib可明顯減弱Nic對(duì)APD50及APD90的作用。 二、尼可地爾對(duì)心肌肥厚大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響 采用腹腔注射L-thy建立大鼠心肌肥厚模型。用免疫組織化學(xué)染色法觀察Nic對(duì)Fas和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果表明：與模型組比較，Nic可明顯抑制肥厚心肌組織Fas蛋白的表達(dá)(P＜0.01)，

8、促進(jìn)Bcl-2蛋白的表達(dá)(P＜0.05或P＜0.01)。與單用Nic組相比，合用Glib后Fas蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，而Bcl-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)。 三、尼可地爾對(duì)心肌肥厚大鼠c-fos、c-jun和TGF-β1表達(dá)的影響 采用定磷法測(cè)定大鼠心肌組織CaN活力，觀察Nic對(duì)其活力的影響；用半定量RT-PCR法檢測(cè)Nic對(duì)心肌組織增殖相關(guān)基因c-fos、c-jun和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1

9、)mRNA表達(dá)的影響；用ELISA法檢測(cè)Nic對(duì)心肌組織TGF-β1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：Nic可顯著降低心肌肥厚大鼠心肌組織CaN活力(P＜0.01)，減少c-fos、c-jun及TGF-β1mRNA含量(P＜0.05或P＜0.01)，下調(diào)TGF-β1蛋白的表達(dá)(P＜0.01)；Glib可減弱Nic的上述作用(P＜0.05或P＜0.01)。 結(jié)論： 1.Nic能顯著抑制Iso引起的小鼠心肌肥厚，此作用可能與Nic增

10、強(qiáng)心肌組織清除氧自由基能力、減少脂質(zhì)過氧化物生成等有關(guān)。 2.Nic能顯著抑制L-thy誘發(fā)的大鼠心肌肥厚，此作用可能與Nic抑制心肌細(xì)胞線粒體脂質(zhì)過氧化，顯著改善能量代謝等有關(guān)。 3.Nic可濃度依賴性的縮短心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的APD50及APD90，其中對(duì)APD90的作用更為顯著，Glib可減弱Nic對(duì)APD的作用，提示Nic縮短APD50及APD90的作用與其開放鉀通道關(guān)系密切。 4.Nic可抑制Fas蛋白的