參蛇洗劑抗皮炎濕疹模型藥效學(xué)及其抗炎機制研究.pdf

1、皮炎濕疹是臨床常見的一組變態(tài)反應(yīng)性皮膚病,主要包括變應(yīng)性接觸性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)、濕疹和特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis,AD),發(fā)病率較高,因其病程遷延且常伴有明顯的瘙癢癥狀而嚴重影響患者的生活質(zhì)量。目前針對該組疾病的藥物治療主要集中在系統(tǒng)應(yīng)用抗組胺類藥物和局部使用糖皮質(zhì)激素等對癥治療,但因其病因及發(fā)病機制復(fù)雜,治療過程漫長,且極易反復(fù),加上這類藥物長期使用具有潛在的副

2、作用,使療效肯定且副作用較小的抗皮炎濕疹藥物的研發(fā)成為臨床的迫切需求。
　　 中醫(yī)藥對皮炎濕疹的治療獨具優(yōu)勢,能通過多種途徑作用,有效祛風(fēng)利濕、清熱潤燥,抗過敏,且講究諸藥協(xié)同,重視整體平衡,因而療效好,副作用少。參蛇洗劑由苦參、蛇床子、黃柏、當(dāng)歸、川芎、大黃、冰片等7味藥組成,諸藥協(xié)同組方,可共同發(fā)揮抗炎抑菌、祛風(fēng)潤燥、涼血活血之功效。同時,通過皮膚給藥,不僅可以避免口服給藥的胃腸道刺激,降低全身的血藥濃度,減少毒副作用,而且

3、使用方便,提高了患者的順應(yīng)性,有望為皮炎濕疹的臨床治療提供一種新的制劑。
　　 在研究皮炎濕疹的過程中,人們利用小鼠、大鼠、豚鼠等建立了很多動物模型,這些模型為研究皮炎濕疹的病因病機、藥物治療和新藥開發(fā)等提供了良好的平臺和工具。其中最為經(jīng)典的是急性期模型——小鼠ACD模型和慢性期模型——小鼠慢性皮炎濕疹模型。
　　 本研究通過建立小鼠急慢性皮炎濕疹模型,進行參蛇洗劑的藥效學(xué)研究,并從影響炎癥相關(guān)的細胞因子和趨化因子表達的

4、角度對其可能機制進行初步探討,為將其開發(fā)成中藥新藥提供實驗依據(jù)。
　　 第一部分參蛇洗劑對小鼠ACD模型的藥效學(xué)研究
　　 本實驗通過2,4-二硝基氟苯(2,4-Dinitrofluorobenzene,DNFB)腹部致敏和耳部激發(fā)BALB/c小鼠建立ACD模型。60只BALB/c小鼠隨機平分為6組:空白對照組、模型對照組、高中低三個劑量參蛇洗劑組(1∶2,1∶1和1∶0.5)及陽性藥對照組(1％氫化可的松溶液)。以1％

5、 DNFB腹部致敏3天后以1％DNFB涂耳部進行激發(fā),激發(fā)后12h開始分別涂藥治療。在激發(fā)前、激發(fā)后12h和激發(fā)后48h分別對小鼠耳厚度及耳變應(yīng)反應(yīng)程度進行測量評分,計數(shù)1min內(nèi)小鼠搔抓耳部次數(shù),小鼠耳部皮損以HE染色,觀察皮膚炎性細胞浸潤等病理變化情況。
　　 結(jié)果顯示,不同濃度的參蛇洗劑均能減輕小鼠ACD模型的耳厚度和變應(yīng)反應(yīng)評分,緩解小鼠搔抓現(xiàn)象,減輕耳部皮膚炎癥程度,總體治療上各濃度組及1％氫化可的松溶液組沒有明顯統(tǒng)計

6、學(xué)差異,但改善淋巴細胞浸潤程度弱于1％氫化可的松溶液,而小鼠搔抓耳部次數(shù)明顯少于1％氫化可的松溶液組。提示參蛇洗劑對ACD可能具有較好的治療作用,在1∶0.5至1∶2濃度之間不呈劑量依賴性,在總體治療作用上和1％氫化可的松溶液相當(dāng),改善淋巴細胞浸潤上稍弱于1％氫化可的松溶液,但在抗瘙癢上明顯優(yōu)于1％氫化可的松溶液。
　　 第二部分參蛇洗劑對小鼠慢性皮炎濕疹模型的藥效學(xué)研究
　　 本實驗通過2,4-二硝基氯苯(2,4-Di

7、nitrochlorobenzene,DNCB)腹部致敏和反復(fù)耳部激發(fā)BALB/c小鼠建立慢性皮炎濕疹模型。60只BALB/c小鼠隨機平分為6組:空白對照組、模型對照組、高中低三個劑量參蛇洗劑組(1∶2,1∶1和1∶0.5)及陽性藥對照組(1％氫化可的松溶液)。以7％ DNCB100μl腹部致敏5天后以0.5％DNCB20μl涂耳部進行激發(fā),其后每3天激發(fā)一次,共4次,首次激發(fā)后12h開始分別涂不同藥物治療。在激發(fā)前、每次激發(fā)后24h和

8、末次激發(fā)后第3天分別對小鼠耳厚度及耳變應(yīng)反應(yīng)程度進行測量評分,計數(shù)1 min內(nèi)小鼠搔抓耳部次數(shù),并以HE染色觀察小鼠耳部皮膚炎性細胞浸潤等病理變化情況。
　　 結(jié)果顯示,不同濃度的參蛇沈劑均能減輕小鼠慢性皮炎濕疹模型的耳厚度和變應(yīng)反應(yīng)評分,顯著緩解小鼠搔抓現(xiàn)象,減輕耳部皮膚炎癥程度,從臨床和病理兩方面,總體治療上參蛇洗劑在改善耳厚度、變應(yīng)反應(yīng)評分及淋巴細胞浸潤方面稍遜于1％氫化可的松溶液,但在改善瘙癢方面,則強于1％氫化可的松溶

9、液。提示參蛇洗劑將來或許能運用于臨床治療慢性皮炎濕疹類皮膚病,尤其是在緩解瘙癢方面具有獨到的效果。
　　 第三部分參蛇洗劑治療小鼠皮炎濕疹模型的抗炎機制初探
　　 在藥效學(xué)研究基礎(chǔ)上,對前兩部分采集的血清及耳標本作機制研究。ELISA檢測血清中TNF-α、IFN-γ、 IL-1β、IL-4及CCL27蛋白水平,realtime PCR檢測皮損處上述因子的mRNA水平。
　　 結(jié)果發(fā)現(xiàn),小鼠ACD和慢性皮炎濕疹建模

10、后,外周血中TNF-α和IFN-γ水平均明顯下降,IL-1β和IL-4水平明顯增高,呈現(xiàn)典型的Th2型免疫反應(yīng);而皮損處TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4和CCL27mRNA表達水平均明顯增高,顯示出明顯的炎癥反應(yīng)。經(jīng)參蛇洗劑治療后,ACD小鼠外周血上述中細胞因子水平變化均不明顯,慢性皮炎濕疹小鼠僅高濃度參蛇洗劑組外周血IL-4水平降低;而皮損處上述因子的mRNA表達水平均顯著下降,各濃度參蛇洗劑組間差異不明顯,顯示出炎癥的減