丹參素對B16F10黑色素瘤惡性生物行為的影響.pdf

1、背景國外有關(guān)腫瘤高凝學(xué)說的提出，使得活血化瘀藥對腫瘤治療的研究引起了人們的高度重視，而目前關(guān)于活血化瘀藥物對腫瘤治療是否取得良好的作用，還存在爭議。丹參是最常用的活血化瘀中藥之一，近年來關(guān)于丹參對腫瘤的治療作用廣受關(guān)注，其實驗結(jié)果也存在著很大的分歧。丹參素[D-(+)-β-(3,4-dihydoxy-phenylalanine)；DSS]是丹參中的主要活性成分之一，不僅具有抗血栓、抗動脈粥樣硬化的藥效，而且還有抗氧化、抗炎、清除自由基、

2、增強免疫等多種與腫瘤微環(huán)境學(xué)說相關(guān)的藥理活性。本課題從體內(nèi)外研究丹參素對腫瘤惡性生物行為的影響及其作用機(jī)制，為闡明丹參對腫瘤的作用提供實驗依據(jù)，同時為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 目的：研究丹參素體內(nèi)外對腫瘤惡性生物行為的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法：體外通過MTS/PMS比色法觀察丹參素對B16F10黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響；采用Boyden趨化小室法觀察丹參素對B16F10細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響；采用蛋白免疫印跡(

3、Western blot)技術(shù)檢測丹參素對B16F10黑色素瘤細(xì)胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響。分別采用MTS/PMS比色法、Boyden趨化小室法、HUVEC小管形成實驗觀察丹參素對VEGF所誘導(dǎo)的HUVEC增值、遷移和管腔結(jié)構(gòu)形成的影響。體內(nèi)通過足墊注射B16F10黑色素瘤細(xì)胞，復(fù)制自發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移模型，觀察丹參素對自發(fā)轉(zhuǎn)移模型中原發(fā)灶瘤重及肺腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)的影響；采用免疫組化法檢測丹參素對B16F10黑色素瘤原發(fā)灶組織

4、中VEGF、MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響。通過尾靜脈注射B16F10黑色素瘤細(xì)胞，復(fù)制實驗性腫瘤轉(zhuǎn)移模型，觀察丹參素對實驗動物免疫器官及肺腫瘤轉(zhuǎn)移節(jié)結(jié)數(shù)的影響。
　　 結(jié)果：體外100μM丹參素具有促進(jìn)B16F10黑色素瘤細(xì)胞增殖的作用，促進(jìn)增殖率達(dá)17％，而0.01μM、0.1μM、1μM、10μM丹參素對B16F10細(xì)胞增殖無明顯影響；丹參素能顯著抑制B16F10細(xì)胞的侵襲和遷移，0.05μM、0.5μM、5μM丹參素抑

5、制侵襲率分別達(dá)16％、37％、52％，0.5μM、5μM丹參素抑制B16F10細(xì)胞遷移率分別達(dá)59.4％、73.7％。Western blot結(jié)果表明，丹參素能顯著抑制B16F10細(xì)胞中VEGF、MMP-2、MMP-9的表達(dá)。體外，100μM丹參素顯著促進(jìn)VEGF誘導(dǎo)的HUVEC增殖，促進(jìn)增殖率為34％，5μM、50μM丹參素顯著抑制VEGF誘導(dǎo)的HUVEC的遷移，抑制率為58.4％、75.4％。體外4μM、20μM丹參素能抑制VEGF

6、誘導(dǎo)的HUVEC小管形成。體內(nèi)，對自發(fā)轉(zhuǎn)移模型，高劑量丹參素(40mg/kg/day)促進(jìn)原發(fā)灶腫瘤增殖，促進(jìn)增殖率達(dá)54.5％；但能有效抑制肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)；原發(fā)瘤切片進(jìn)行免疫組化，結(jié)果顯示，丹參素降低B16F10黑色素瘤組織中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)。實驗性轉(zhuǎn)移模型結(jié)果顯示，丹參素能提高動物胸腺指數(shù)，減少肺腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。
　　 結(jié)論：體內(nèi)外丹參素具有較強的抑制B16F10腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移的能力，抑制相關(guān)蛋白