補骨脂乙素對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡的影響.pdf

1、目的：研究補骨脂乙素（Isobavachalcone，IBC)對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞生長抑制及轉(zhuǎn)移的影響，為進一步研究補骨脂乙素的抗腫瘤機制提供參考。
　　方法： MTT法測定補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞生長的抑制效應(yīng)；倒置顯微鏡觀察補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞形態(tài)的影響；流式細(xì)胞儀檢測補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞周期分布的影響；劃痕實驗測定補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞體外遷移的影響；流式細(xì)胞術(shù)Annexin V/PI雙染

2、法檢測補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞凋亡水平的影響；Hoechst33258染色法觀察補骨脂乙素誘導(dǎo)B16F10細(xì)胞凋亡形態(tài)的變化；熒光染料DCFH-DA染色檢測補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞內(nèi)活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）水平的影響，熒光染料JC-1染色法檢測補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞線粒體膜電位的影響；QPCR檢測補骨脂乙素對B16F10細(xì)胞Bcl-2、Bax、caspase-3基因表達(dá)的影響。

3、>　　結(jié)果：（1）經(jīng)不同濃度(20、40、60、80μmol/L)補骨脂乙素分別處理24 h和48 h， B16F10細(xì)胞增殖活力降低，當(dāng)補骨脂乙素濃度增加到40μmol/L以上時(40、60、80μmol/L)細(xì)胞增殖率明顯低于對照組，呈濃度及時間依賴性變化。24 h和48 h的IC50分別為（61.52±1.30）μmol/L和（50.79±1.02）μmol/L。
　?。?）不同濃度的補骨脂乙素處理B16F10細(xì)胞24 h，

4、對照組細(xì)胞貼壁狀態(tài)良好，排列規(guī)則緊密；而給藥組部分細(xì)胞由梭形變圓、皺縮，偽足消失，并出現(xiàn)脫落死亡細(xì)胞，隨著藥物濃度的增加，上述形態(tài)改變更加明顯。
　?。?）40、60μmol/L補骨脂乙素處理B16F10細(xì)胞24 h后，G0/G1期細(xì)胞顯著增加， S期細(xì)胞顯著減少，G2/M期細(xì)胞比例變化不明顯，表明補骨脂乙素阻滯B16F10細(xì)胞周期于G0/G1期；80μmol/L補骨脂乙素處理B16F10細(xì)胞24 h，細(xì)胞周期各時相無顯著變化。<

5、br>　　（4）10、20、40μmol/L補骨脂乙素處理B16F10細(xì)胞24 h后，與對照組相比，細(xì)胞遷移受到抑制，藥物濃度越高抑制越明顯。
　?。?）40、60、80μmol/L補骨脂乙素處理B16F10細(xì)胞24 h后，Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率分別為（23.63±4.018)％、(33.70±6.89)%和(75.47±2.30)%。Hoechst染色發(fā)現(xiàn)，凋亡細(xì)胞染色質(zhì)凝集呈亮藍(lán)色，核固縮成半月形，呈現(xiàn)出

6、細(xì)胞凋亡核形態(tài)。（6）不同濃度補骨脂乙素處理B16F10細(xì)胞24 h后，20、40、60μmol/L處理組B16F10細(xì)胞Bax、Bcl-2基因表達(dá)量同時升高；藥物濃度為80μmol/L時，Bax、Bcl-2基因表達(dá)量下降，但仍然比對照組高。另外，Bcl-2/Bax比率也呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢。與對照組相比，給藥組細(xì)胞caspase-3基因表達(dá)量均顯著上升，但各濃度之間無顯著性差異。
　?。?）不同濃度的補骨脂乙素處理B16F1