生長(zhǎng)激素在體外對(duì)膽管癌、胰腺癌細(xì)胞株的增殖及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、生長(zhǎng)激素(Growth Hormone，GH)是由腦垂體前葉嗜酸性細(xì)胞分泌的一種分子量為22000U的單一肽鏈的蛋白質(zhì)激素。GH的基本生理功能是刺激所有機(jī)體組織的發(fā)育，增加體細(xì)胞的體積和數(shù)目，它影響幾乎所有的組織類型，包括骨、軟骨、脂肪組織、免疫系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)，各器官在GH的影響下生長(zhǎng)變大，骨骼增長(zhǎng)導(dǎo)致人體的增高，對(duì)腦組織和造血系統(tǒng)也有作用。GH同時(shí)也具備其他功能，如對(duì)蛋白代謝及機(jī)體組織構(gòu)成具有急性或慢性的效應(yīng)，調(diào)節(jié)體液平衡、碳水化合物

2、及脂類代謝等。蛋白質(zhì)合成與分解的平衡決定了機(jī)體的蛋白平衡。在生理、病理狀態(tài)下這種平衡也可通過一些非激素因素而發(fā)生一系列改變，例如營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、感染等。 自1989年由瑞士Serono公司研制重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)成功以來(lái)，已廣泛應(yīng)用于GH缺乏癥的病人，同時(shí)研究也證實(shí)GH在圍手術(shù)期能增進(jìn)機(jī)體免疫、增加蛋白合成及改善營(yíng)養(yǎng)方面的作用。通過減緩機(jī)體蛋白及總體細(xì)胞群的丟失，GH的臨床應(yīng)用已使不少處于負(fù)氮平衡的非腫瘤病人度過難關(guān)。

3、臨床上，蛋白-營(yíng)養(yǎng)不良及嚴(yán)重的負(fù)氮平衡極大的阻礙了腫瘤病人的療效并增加了患者的病死率，此時(shí)機(jī)體氮平衡的改善顯得更為迫切。但顧慮到GH對(duì)腫瘤細(xì)胞的促增殖效應(yīng)，在治療上擴(kuò)大GH到腫瘤病人的應(yīng)用仍受到極大的限制，盡管目前對(duì)GH潛在刺激腫瘤細(xì)胞的作用還存在很大爭(zhēng)議，對(duì)于腫瘤個(gè)體，研究顯示外源性GH可延緩機(jī)體總蛋白及細(xì)胞群的丟失，改善營(yíng)養(yǎng)，增加瘦體重，增強(qiáng)化療效果及降低化療毒性，增進(jìn)細(xì)胞及體液免疫功能，減輕惡病質(zhì)從而最終使宿主受益。從這個(gè)意義上來(lái)

4、說，GH可在一定程度上減少腫瘤患者的病死率。但作為有絲分裂原的GH有可能促進(jìn)組織中的細(xì)胞更新而增加了某些細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化素質(zhì)，對(duì)腫瘤細(xì)胞也可能加劇其惡性生物學(xué)行為。有鑒于該原因，多數(shù)臨床醫(yī)師仍堅(jiān)持認(rèn)為，對(duì)GH應(yīng)用于腫瘤病人這一問題必須相當(dāng)謹(jǐn)慎。綜合近年來(lái)的研究結(jié)果，關(guān)于GH對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響這一課題，目前仍有許多亟待解決的問題，具體表現(xiàn)在：1)“GH對(duì)腫瘤是否具有促增殖作用”這一命題可能因腫瘤病理類型、研究方法、觀察時(shí)間的不同而結(jié)果各異

5、；2)前瞻性研究仍然缺乏；3)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的差異，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床實(shí)驗(yàn)的差異等；4)在作用機(jī)制上仍缺乏系統(tǒng)研究；5)流行病學(xué)調(diào)查的質(zhì)量：在病例選擇上，應(yīng)注意兒童有無(wú)腫瘤高危因素，成人有無(wú)足夠的隨訪時(shí)間，病人是否為同一中心資料以及GH治療的劑量、應(yīng)用時(shí)間、療效的個(gè)體差異等偏差。 有鑒于此，我們以膽管癌細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞作為研究對(duì)象作一系列體外研究，觀察外源性GH對(duì)兩株癌細(xì)胞增殖的影響，并以流式細(xì)胞技術(shù)觀測(cè)GH作用下的細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)特征；

6、以安慰劑為對(duì)照，對(duì)腫瘤細(xì)胞分泌的IGF1/2量以ELISA法檢測(cè)，同時(shí)將細(xì)胞爬片、固定后，用原位雜交法檢測(cè)IGF1/2RmRNA的表達(dá)，首次從蛋白基因的角度，對(duì)GH作用于膽、胰癌細(xì)胞的可能機(jī)制作出初步闡明。具體的研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下： 一、 GH對(duì)膽、胰癌細(xì)胞株增殖和細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)的影響體外培養(yǎng)膽管癌細(xì)胞株QBC939和胰腺癌細(xì)胞株BXPC-3至指數(shù)生長(zhǎng)期，加入不同劑量的GH(終濃度為50ng/ml和100ng/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)2

7、h、24h后分別細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的變化及生長(zhǎng)周期，發(fā)現(xiàn)外源性GH能促進(jìn)細(xì)胞增殖、提高S期細(xì)胞百分率及增殖指數(shù)(PI)，但與劑量無(wú)顯著關(guān)系。 二、GH對(duì)腫瘤細(xì)胞分泌IGFs的影響及IGFsRmRNA表達(dá)的影響體外培養(yǎng)膽管癌細(xì)胞株QBC939和胰腺癌細(xì)胞株BXPC-3至指數(shù)生長(zhǎng)期，加入不同劑量的GH(終濃度為50ng/ml和100ng/ml)，分別繼續(xù)培養(yǎng)2h、24h后吸取其上清液離心，以ELISA法檢測(cè)IGFs濃度，同時(shí)