褪黑素對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990生長(zhǎng)及血管生成的影響.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分：褪黑素對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990生長(zhǎng)及血管生成的影響 目的：研究褪黑素( Melatonin，MT)對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株SW1990細(xì)胞體外生長(zhǎng)及血管形成的影響，同時(shí)探討其對(duì)胰腺癌細(xì)胞株SW1990作用的可能機(jī)制。 方法：采用MT濃度為0.1、0.5、1.0、2.5、5.0mmol/L處理胰腺癌SW1990細(xì)胞后，應(yīng)用四氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)OD值，計(jì)算對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組SW1990細(xì)胞

2、的抑制率，并計(jì)算最適宜的褪黑素IC50；取MT濃度為1.0、2.5、5.0mmol/L處理胰腺癌SW1990細(xì)胞后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)及Annexin V/PI早期凋亡檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的變化，免疫印跡法(Westen Blotting)檢測(cè)細(xì)胞凋亡因子cl-2、bax蛋白表達(dá)情況，RT-PCR檢測(cè)VEGFmRNA表達(dá)水平的變化，雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)觀察MT對(duì)血管生成的影響。 結(jié)果：(1) MTT法顯示MT可明顯抑制SW1990細(xì)

3、胞的生長(zhǎng)，并隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增強(qiáng)(P<0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)及Annexin V/PI早期凋亡檢測(cè)出SW1990細(xì)胞經(jīng)MT作用48小時(shí)后，細(xì)胞有明顯凋亡，且以早期凋亡為主，在1.0mmol/L濃度下早期凋亡率為(24.5±2.14)％，而在5.0mmol/L濃度下為(44.76±3.24)％，與MT濃度呈正相關(guān)，且隨著濃度的增加SW1990細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞比例上升，從(72.55±4.32)％上升到(8

4、5.33±5.32)％，S期細(xì)胞比例下降(P<0.05)。(3)Western Blot結(jié)果顯示MT作用于SW1990細(xì)胞48h可使細(xì)胞中的bcl-2蛋白表達(dá)下降，bax蛋白表達(dá)升高，bcl-2/bax比值分別為對(duì)照組1.84±0.21，MTi組1.21±0.25，MT2組0.70±0.19，MT3組0.55±0.13，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)RT-PCR檢測(cè)VEGF表明SW1990細(xì)胞經(jīng)MT作用48小時(shí)后，VEGFm

5、RNA的表達(dá)呈濃度依賴(lài)性下降，各濃度組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(5)雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MT處理組(1.0mmol/L、2.5 mmol/L、5.0 mmol/L)雞胚絨毛尿囊膜二、三級(jí)血管數(shù)目減少，濃度越高作用越明顯，各組三級(jí)血管的數(shù)目與生理鹽水組比較，差異有顯著性(P<0.01)。從形態(tài)上看，生理鹽水組(NS)血管分支狀結(jié)構(gòu)完整，各級(jí)血管清晰可見(jiàn)，MT組可見(jiàn)血管明顯變細(xì)，呈迂曲狀向外周生長(zhǎng)，失去正常的血管樹(shù)枝

6、狀分布，并可見(jiàn)雞胚絨毛尿囊膜水腫。 結(jié)論：MT可抑制胰腺癌SW1990細(xì)胞的生長(zhǎng)，且呈時(shí)間和劑量的依賴(lài)性，其機(jī)制可能是直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖；阻滯細(xì)胞周期于靜止期；誘導(dǎo)細(xì)胞早期凋亡；抑制血管生成。 第二部分：褪黑素聯(lián)合吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞SW1990的影響 目的：探討褪黑素(melatonin，MT)聯(lián)合吉西他濱(Gemcitabine，GEM)對(duì)胰腺癌SW1990細(xì)胞的協(xié)同抑制作用及機(jī)制。 方法：以濃度為

7、1.5mmol/L的褪黑素聯(lián)合20μmol/L的吉西他濱處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胰腺癌SW1990細(xì)胞，應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)OD值，計(jì)算對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組SW1990細(xì)胞的抑制率；AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)SW1990細(xì)胞早期凋亡情況；RT-PCR半定量檢測(cè)Bcl-2mRNA及BaxmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：褪黑素和吉西他濱都能有效地抑制人胰腺癌SW1990細(xì)胞增殖，二者聯(lián)合作用后，具有協(xié)同效應(yīng)，MT組作用SW1990細(xì)胞48h