淺藍(lán)菌素對(duì)人膽管癌細(xì)胞株RBE生長(zhǎng)的影響及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、 碩士學(xué)位論文 論文題目 淺藍(lán)菌素對(duì)人膽管癌細(xì)胞株 RBE 生長(zhǎng)的影響 及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究 研 究 生 姓 名 萬(wàn) 云 指導(dǎo)教師姓名 許春芳 專 業(yè) 名 稱 消化病學(xué) 研 究 方 向 胰腺疾病的基礎(chǔ)及臨床研究 論文提交日期 2013 年 5 月 淺藍(lán)菌素對(duì)人膽管癌細(xì)胞株 RBE 生長(zhǎng)的影響及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究 中文摘要 I 淺藍(lán)菌素對(duì)人膽管癌細(xì)胞株 RBE 生長(zhǎng)的影響及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究 中文摘要 目的 目的：探討脂肪酸合酶（fat

2、ty acid synthane，F(xiàn)AS）抑制劑淺藍(lán)菌素（Cerulenin，Cer）對(duì)人膽管癌細(xì)胞株RBE 的生長(zhǎng)抑制作用，并初步探討可能的作用機(jī)制。 方法： 體外培養(yǎng)膽管癌細(xì)胞 RBE， 應(yīng)用不同濃度(0、 2.5、 5、 10、 20、 40ug／m1)Cer處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞， 在干預(yù)后的不同時(shí)間段收集細(xì)胞。 采用細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)法(MTT)檢測(cè) OD 值，計(jì)算對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組 RBE 細(xì)胞的抑制率及最適宜的 CerIC50；

3、取 Cer 濃度為 0、5、10、20ug／m1 處理膽管癌 RBE 細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的情況；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè) FASmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA 表達(dá)水平的變化；免疫印跡法(WesternBlot)檢測(cè)細(xì)胞凋亡因子 Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 結(jié)果： （1）MTT 法顯示不同濃度的 Cer 可明顯抑制膽管癌細(xì)胞株 RBE 的增殖,細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率呈時(shí)間-濃度依賴性

4、(P<0.05)。 （2）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，RBE細(xì)胞經(jīng) Cer 干預(yù) 48 小時(shí)后， 隨著藥物濃度增加， 細(xì)胞周期 S 期比例由 （6.97± 0.37） %上升到（26.43± 1.38）%，G2 期細(xì)胞比例下降（P<0.05） 。RBE 細(xì)胞經(jīng) 5、10、20ug／m1Cer 作用 48h 后的凋亡率分別為 （10.73± 0.82） %、 （25.8± 1.59） %、

5、（45.1± 1.73） %，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 （3）RT-PCR 檢測(cè) FASmRNA、Bcl-2mRNA、 BaxmRNA 顯示 RBE 細(xì)胞經(jīng) Cer 作用 48 小時(shí)后， FASmRNA、 Bcl-2mRNA 的表達(dá)呈濃度依賴性下降，BaxmRNA 呈濃度依賴性升高，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05） 。 （4）Western Blot 結(jié)果顯示 RBE