山西漢族先天性巨結(jié)腸癥患兒RET和EDNRB基因SNP分析.pdf

1、背景：
　　 先天性巨結(jié)腸癥(Hirschsprungdisease，HSCR)又稱腸無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥(aganglionosis)，是典型的腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常疾病。其主要病理特征為結(jié)腸或者直腸的肌層及粘膜下層神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失，腸道神經(jīng)調(diào)節(jié)紊亂，以致受累腸段痙攣收縮，其近端結(jié)腸代償性擴(kuò)張與肥厚，形成巨結(jié)腸，從而導(dǎo)致小兒嚴(yán)重的腸梗阻及便秘等消化道癥狀。
　　 目前的研究顯示多種基因與HSCR發(fā)病有關(guān)，主要有來自腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中

2、起主要作用的2個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，RET信號(hào)通路和內(nèi)皮素B信號(hào)通路。迄今已發(fā)現(xiàn)與之相關(guān)的基因主要有RET原癌基因(RETproto-oncogen)及內(nèi)皮素受體B基因（EndothelinreceptorB，EDNRB）。研究學(xué)者推測基因單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)和單倍型可能作為修飾因子存在，增加HSCR患病風(fēng)險(xiǎn)。由于遺傳背景等方面的差異，不同的人人群和種族中多態(tài)性存在不同。
　

3、　 目的：
　　 研究山西漢族人群先天性巨結(jié)腸癥患兒RET基因和EDNRB基因常見單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)與HSCR發(fā)病的關(guān)系。
　　 方法：
　　 收集2008年1月至2010年12月在山西省兒童醫(yī)院就診，經(jīng)術(shù)后病理切片證實(shí)的80例漢族先天性巨結(jié)腸癥患兒，且均為散發(fā)性。收集同期山西省兒童醫(yī)院體檢健康兒童80例。經(jīng)家長及患兒同意后均取靜脈血3niL，EDTA抗凝。應(yīng)用高分辨率熔解曲線技術(shù)(HighResolutionM

4、elt，HRM)以及PCR產(chǎn)物測序，序列比對的方法，對山西省80例散發(fā)性先天性巨結(jié)腸癥患兒和80例健康兒童進(jìn)行RET基因常見多態(tài)位點(diǎn)p.A45A，P.V125V,p.A432A，P.G691S，p.L769L，p.S904S以及EDNRB基因1-4號(hào)外顯子多態(tài)位點(diǎn)的分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、本課題首次應(yīng)用高分辨熔解曲線技術(shù)并且首次將該技術(shù)對山西漢族先天性巨結(jié)腸癥患兒RET基因單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下;<

5、br>　　 RET基因p.A45A位點(diǎn)存在多態(tài)性，病例組與對照組相比兩組間等位基因差異顯著(X2=35.60，P

6、布頻率存在顯著差異(X2=37.458，P　　 2、EDNRB基因中在第4外顯子發(fā)現(xiàn)多態(tài)位點(diǎn)c831G>A，引起亮氨酸的同義突變(p.L277L)。其中A等位基因頻率為0.55，G等位基因頻率為0.45。未發(fā)現(xiàn)其他已報(bào)道突變及多態(tài)位點(diǎn)。
　　 結(jié)論：
　　 1、在山西漢族人群中，RET基因2號(hào)外顯子p.A45