RET基因多態(tài)性與先天性巨結(jié)腸患病風(fēng)險(xiǎn)研究.pdf

1、目的：先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung’s Disease，HSCR)又稱腸管無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥，是小兒常見的先天性消化道畸形，發(fā)病率居先天性消化道畸形第二位，以不同病變范圍內(nèi)腸段肌問神經(jīng)叢和粘膜下神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的缺失為主要病理學(xué)特征。目前研究證明它是一種的多基因型疾病，是多個(gè)基因位點(diǎn)相互作用的結(jié)果，其中最主要的基因是RET原癌基因(RET proto-oncogen)。RET基因具有多態(tài)性和單倍型，可能作為基因修飾因子，而且可能神

2、經(jīng)嵴胚細(xì)胞發(fā)育過程中發(fā)生紊亂的危險(xiǎn)性增加與之相關(guān)。本研究通過深圳地區(qū)先天性巨結(jié)腸患兒RET基因上intronlC>T(rs2435357)單核苷酸多態(tài)性的研究及基因多態(tài)表達(dá)情況，明確其與HSCR的關(guān)聯(lián)性，揭示intronlC>T(rs2435357)多態(tài)性在深圳地區(qū)人群散發(fā)性HSCR發(fā)病中所起的重要作用，探討其與HSCR發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，并為HSCR的發(fā)病機(jī)制提供線索。
　　 方法：收集2008年5月至2011年8月在深圳市兒童醫(yī)

3、院外科診治的HSCR患兒的靜脈全血標(biāo)本115例，均為散發(fā)性，其中男90例，女25例，患有TCA(全結(jié)腸型先天性巨結(jié)腸)，L-HSCR(長段型先天性巨結(jié)腸)和S-HSCR(短段型先天性巨結(jié)腸)的病人分別為4人，6人和105人，年齡17天-81天，無先天性巨結(jié)腸家族性遺傳病史。所有患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)確認(rèn)為HSCR。收集139名性別和年齡與之匹配的來源于深圳市兒童醫(yī)院體檢的正常兒童靜脈全血標(biāo)本作為對照組。抽取研究樣本靜脈全血3ml使用QI

4、Aamp-Blood Kit(Qiagen，Hilden，Germany)試劑盒進(jìn)行提取血樣本基因組DNA，聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)擴(kuò)增RET基因intronl C>T(rs2435357)，然后應(yīng)用直接測序方法分析intronl C>T(rs2435357)的基因多態(tài)性改變，對基因多態(tài)性位點(diǎn)等位基因頻率在兩組中的差異進(jìn)行比較，比較不同基因型與先天性巨結(jié)腸風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性?；貧w模型中使用OR

5、值和95％置信區(qū)間(CI)作為基因型危險(xiǎn)性的評價(jià)指標(biāo)。
　　 結(jié)果：RET基因intronlC>T(rs2435357)基因頻率在病例和正常對照人群的分布具有顯著差異(P<0.001)，攜帶RET基因intronlTT基因型者罹患先天性巨結(jié)腸的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶RET intronlCC基因型者的19.22倍(95％CI，7.54-48.99)。RET基因intronlTT(OR=19.22，95％CI=7.54-48.99)基因型能明