灰氈毛忍冬中綠原酸的分離純化及功能性研究.pdf

1、金銀花為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb，紅腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq，山銀花，LoniceraConfusaDC，或毛花柱忍冬LoniceradasystylaRehd的干燥花蕾或帶初開的花，是一種藥食兼用植物資源，其有效活性成分為綠原酸，綠原酸是一種縮酚酸，屬酚類化合物，是植物在有氧呼吸過程中，經(jīng)莽草酸途徑形成的一種苯丙素類化合物，具有抗菌、抗病毒、解熱、升高白細(xì)胞、保肝利膽、免疫調(diào)節(jié)、

2、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基等作用。 本試驗(yàn)旨在以重慶江津南部山區(qū)豐富的灰氈毛忍冬為原料，對(duì)灰氈毛忍冬籽的組成成分，灰氈毛忍冬中各部位總黃酮甙和綠原酸的含量，灰氈毛忍冬花中綠原酸的提取分離純化及其花的提取物的功能特性進(jìn)行了研究，確定了灰氈毛忍冬中綠原酸最佳提取和分離純化的條件。主要研究結(jié)果如下： 1.分析了灰氈毛忍冬籽的營養(yǎng)成分、氨基酸組成、微量元素的含量以及金銀花籽油的理化指標(biāo)和脂肪酸組成。結(jié)果表明，金銀花籽含2

3、5.82﹪的油，23.78﹪蛋白質(zhì)，23.97﹪的糖類，13.84﹪的水分和6.95﹪的灰分；金銀花籽蛋白質(zhì)中氨基酸種類齊全；金銀花籽油富含不飽和脂肪酸，含量高達(dá)85.28﹪。金銀花籽油的理化指標(biāo)為相對(duì)密度d4200.9158，折光指數(shù)n201.4796，皂化值180.31mgKOH/g，酸價(jià)2.55mgKOH/g。 2.采用傳統(tǒng)索氏抽提法提取，分別測定灰氈毛忍冬的莖、葉、花、籽中綠原酸和總黃酮甙的含量，結(jié)果表明，灰氈毛忍冬莖、

4、葉、花、籽中綠原酸的含量以花中為最高，達(dá)到了6.33﹪，葉和莖次之，分別為4.34﹪和3.47﹪，而在金銀花籽中含量最少僅為0.34﹪。另外，灰氈毛忍冬莖、葉、花、籽中總黃酮甙的含量則以葉中總黃酮甙含量最高，達(dá)到35.64mg/g，籽和花次之，分別為29.51mg/g和17.40mg/g，而在金銀花莖中含量最少，僅為10.50mg/g。 3.采用乙醇回流法研究了金銀花中綠原酸的提取工藝。并采用紫外可見分光光度法確定了綠原酸的最大

5、吸收波長為333nm；采用單因素和正交試驗(yàn)的方法，通過多重比較等統(tǒng)計(jì)手段，對(duì)影響綠原酸提取率的主要因素進(jìn)行了分析，找出了從金銀花中提取綠原酸的最佳工藝條件。結(jié)果表明：用紫外可見分光光度法測定金銀花中的綠原酸含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，說明測定結(jié)果重現(xiàn)性好，精密度較高，所得數(shù)據(jù)精確。采用單因素和正交試驗(yàn)的方法，通過多重比較等統(tǒng)計(jì)手段，對(duì)影響綠原酸提取率的主要因素進(jìn)行了分析，得到了從金銀花中提取綠原酸的最佳工藝條件：原材料金銀花，用70﹪乙醇，

6、1：8的料液比在70℃提取4.5h，金銀花粗提物得率為29.09﹪，其中綠原酸的含量達(dá)到了24.31﹪。 4.研究大孔樹脂吸附純化綠原酸的最佳工藝條件和參數(shù)。以綠原酸的純度為考察指標(biāo)，通過比較五種大孔樹脂(D100、D101、D600、NKA-9，聚酰胺粉)對(duì)綠原酸的吸附和解吸附性能，得出聚酰胺粉的吸附和解吸附性能較好，吸附率為84.04﹪，50﹪乙醇洗脫解吸率為64.16﹪。綠原酸的最佳純化工藝為：50﹪乙醇洗脫，pH3.0，

7、流速1.0mL/min，其固形物得率為80.47﹪，綠原酸純度達(dá)78.97﹪。 5.采用高效液相色譜法檢測灰氈毛忍冬的主要功效成分—綠原酸，確定了其檢測條件：HypersiLC1810gm，4.6mm×300mm色譜柱，LC-10AT泵，SPD-10A檢測器，檢測波長333nm，進(jìn)樣20μL，洗脫液為甲醇：1﹪磷酸水溶液=30：70，流速1.0mL/min，該條件下綠原酸的保留時(shí)間為4.452min。 6.研究了金銀花提

8、取物的抗氧化功能，結(jié)果表明金銀花提取物中的綠原酸有比較強(qiáng)的清除O2的能力，且清除能力隨著綠原酸含量的升高而增加。但綠原酸的清除超氧陰離子能力要比抗壞血酸的清除超氧陰離子的能力弱一些，最大清除率并沒有超過50﹪。有較強(qiáng)的清除羥自由基的能力，且清除羥自由基的能力隨綠原酸含量的升高而增強(qiáng)，清除羥自由基的能力要強(qiáng)于抗壞血酸。另外，金銀花提取物中的綠原酸有較強(qiáng)的還原能力，吸光值隨這綠原酸濃度的增加有顯著的增加，是一種良好的抗氧化劑，而綠原酸的還原