利用卵巢癌原位移植瘤模型探討腫瘤標(biāo)記物Ca125與卵巢腫瘤干細(xì)胞關(guān)系的研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文利用卵巢癌原位移植瘤模型探討腫瘤標(biāo)記物Ca125與卵巢腫瘤干細(xì)胞關(guān)系的研究姓名：張惠申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：王沂峰20070403廣州醫(yī)學(xué)院碩士論文利用卵巢癌原位移植瘸模型探討腫瘤標(biāo)記物CAl25與卵巢腫瘤干細(xì)胞關(guān)系的研究3、收集對數(shù)生長期卵巢癌細(xì)胞OVCAR3，流式細(xì)胞儀檢測CAl25的表達(dá)；4、細(xì)胞活力檢測后計數(shù)制成Ixl05／lOp1和2x104／lOItl細(xì)胞懸液各50ttl5、10只NO

2、D／scID(nonobcscdiabetic／severecombinedimmunodeficient)小鼠隨機(jī)分成兩組，每組五只。麻醉后取其俯臥位，打開皮膚，腹膜，暴露右側(cè)卵巢，利用微量注射器由右側(cè)子宮角進(jìn)針入右側(cè)卵巢，注入lOpl細(xì)胞懸液，每個細(xì)胞數(shù)量級設(shè)5只小鼠，撤出注射器后關(guān)腹；6、觀察小鼠成瘤情況，3個月后殺死小鼠取出雙側(cè)卵巢及腹腔其他器官，行常規(guī)病理切片，免疫組織化學(xué)染色等。結(jié)果用卵巢癌細(xì)胞株OVCAR3構(gòu)建動物模型時，

3、2x104，iOItl組中5小鼠的術(shù)側(cè)卵巢明顯增大，HE染色可見核大深染的卵巢癌細(xì)胞，此外還有肝、腹膜、盆壁及對側(cè)卵巢轉(zhuǎn)移，Ixl05／lOId組中只有一個鏡下成瘤伴對側(cè)卵巢轉(zhuǎn)移。Fisher精確檢驗(Fisher’sExactTest)兩組有差異(見附件1)，2xlO～lOId較lxlOs／lOpl更易成瘤。結(jié)論構(gòu)建卵巢的動物模型的方法簡單易行，lOld為最佳容積，2x104／lOis為最佳細(xì)胞濃度；(二)、探討腫瘤標(biāo)記物CAl25與

4、卵巢腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系方法l、同法預(yù)處理小鼠；2、取手術(shù)室切除的上皮性卵巢癌標(biāo)本，制成細(xì)胞懸液；3、細(xì)胞計數(shù)并行活力檢測，用不同的熒光標(biāo)記：(1)、抗CAl25(OCl25)標(biāo)記卵巢癌中表達(dá)CAl25的細(xì)胞，別藻藍(lán)蛋白(APCallophycocyanin紅光)標(biāo)記二抗；(2)、異硫氰酸熒光素(FITC綠光)標(biāo)記線性抗體(抗一CD2，一CD3CDIO，CDl6，CDl4，CDl8，CDl9，CD31、CD64)，藻紅蛋白(PE281)4橙