食管鱗狀細(xì)胞癌患者再生因子Ⅰα表達(dá)的臨床意義.pdf

1、目的：食管癌是嚴(yán)重威脅人類健康及生命的惡性腫瘤之一。我國是食管癌高發(fā)區(qū)，食管癌的發(fā)病率居世界第一位。目前食管癌的早期診斷水平仍欠理想，大部分患者發(fā)現(xiàn)時已到中晚期。當(dāng)今治療食管癌的方法主要是外科手術(shù)結(jié)合放、化療的綜合治療，但食管癌治療效果仍不理想，5年生存率低于30％。如何早期發(fā)現(xiàn)食管癌，及盡早控制食管癌癌前病變的發(fā)展，提高生存率，延長食管癌患者生存時間，一直是醫(yī)療工作者關(guān)注的課題之一。再生因子Iα(Regeneration gene I

2、α， Reg Iα)屬于一種鈣依賴性植物血凝素家族（c型植物血凝素家族），它是一組分泌蛋白，其功能相當(dāng)于急性反應(yīng)蛋白，抗凋亡因子或胰腺β細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞分泌的生長因子，多種功能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。本實驗應(yīng)用定量聚合酶鏈反應(yīng)、免疫組織化學(xué)和ELSIA的方法探討RegIα在正常食管黏膜和食管鱗癌組織中的表達(dá)差異，與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系及手術(shù)前后患者體內(nèi)Reg Iα的表達(dá)水平的變化。意義在于研究RegIα在食管癌病人中的表達(dá)情況，

3、探討其表達(dá)的臨床意義。
　　 方法：(1)食管癌組織標(biāo)本共30例，來自河北省人民醫(yī)院胸外科、河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科，2008年10月-12月的食管癌手術(shù)標(biāo)本（病理證實均為鱗狀細(xì)胞癌），病理診斷為正常的食管黏膜20例作為正常組織對照，取自食管癌組織手術(shù)遠(yuǎn)端5cm。應(yīng)用半定量聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)、免疫組織化學(xué)和ELSIA的方法

4、檢測Reg Iα的表達(dá)。
　　 應(yīng)用RT-PCR的方法檢測RegIαmRNA的表達(dá)，首先提取食管癌和食管正常黏膜組織的總RNA，普通瓊脂糖凝膠電泳測定RNA的完整性。按RT-PCR試劑盒說明制備cDNA，配置20μlPCR反應(yīng)體系，加入自100ngcDNA樣本及合成引物進(jìn)行擴(kuò)增，應(yīng)用凝膠成像儀上掃描記錄各特異性DNA擴(kuò)增片段灰度，比較目的基因與內(nèi)參基因GAPDH的擴(kuò)增片段灰度，用其比值作為mRNA表達(dá)水平的相對參數(shù)。
　　

5、 應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測RegIα蛋白在食管癌組織中的表達(dá)；根據(jù)0---3+的評分標(biāo)準(zhǔn)：0---不顯色或少于10％的腫瘤細(xì)胞漿呈現(xiàn)任何水平的陽性染色；1+---超過10％的腫瘤細(xì)胞漿呈現(xiàn)微弱染色，或在部分細(xì)胞漿上染色；2+---超過10％的腫瘤細(xì)胞漿全部弱染色；3+---超過10％的腫瘤細(xì)胞漿全部呈現(xiàn)強染色。
　　 (2)患者血液標(biāo)本來源：30例食管癌手術(shù)病人術(shù)前1天和術(shù)后7天采新鮮血，經(jīng)離心獲得血清；20個健康員獻(xiàn)血員血

6、清作為正常對照。.
　　 應(yīng)用ELSIA方法分析食管癌患者血液中RegIα的表達(dá)，結(jié)果判斷：每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值，按標(biāo)準(zhǔn)品濃度及吸光度做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)各待測樣品吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上的位置讀出相應(yīng)濃度。
　　 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗、x2檢驗或秩和檢驗分析，計算P值，以P值＜0.05判斷差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1 RegIα蛋白

7、在正常食管黏膜及食管癌組織中的表達(dá)情況：在20例正常食管黏膜組織中，RegIα表達(dá)均為陰性，但在30例食管癌組織中表達(dá)陽性率為60％(18/30)。統(tǒng)計學(xué)處理顯示，兩組表達(dá)的陽性率差異明顯(P＜0，05)。
　　 2 RegIαmRNA在正常食管黏膜與食管癌組織中表達(dá)情況：食管癌中的Reg IαmRNA的表達(dá)強度明顯高于正常食管黏膜。兩組間Reg IαmRNA的表達(dá)水平存在明顯的差異，RegIαmRNA表達(dá)的相對灰度值分別為：1

8、.132±0.247（食管癌組織），0.719±0.176（正常食管粘膜）；統(tǒng)計學(xué)處理顯示：差異性顯著(P＜0.001)。
　　 3 RegIα的表達(dá)水平與食管癌病理學(xué)特征的關(guān)系：根據(jù)患者術(shù)后的病理學(xué)特征進(jìn)行分組，患者RegIα水平與腫瘤的大小、侵潤深度無明顯相關(guān)(P＞0.05)；但與分化程度與腫瘤是否轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P＜0.001)。
　　 4 RegIα在食管癌患者血清中的表達(dá)水平明顯高于正常對照組，P=0.011;且

9、其表達(dá)水平在食管癌切除后明顯下降，P=0.03。
　　 結(jié)論：
　　 1、RegIα蛋白在正常食管黏膜無表達(dá)，在食管癌中高表達(dá)。
　　 2、RegIα與食管癌的分化、轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，其表達(dá)可能介入食管癌細(xì)胞的分化及轉(zhuǎn)移機制之中。未發(fā)現(xiàn)RegIα與食管癌其它病理特征相關(guān)。
　　 3、食管癌病人RegIαmRNA的表達(dá)水平顯著高于食管正常黏膜，故可作為食管癌早期檢測的標(biāo)志物。
　　 4 RegIα在患者