強脈沖光對TGF-β1誘導(dǎo)的成纖維細胞增殖的影響及ERK抑制劑的作用.pdf

1、目的:
　　 1.觀察轉(zhuǎn)化生長因子-β1對體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞增殖的影響。
　　 2.探討強脈沖光在轉(zhuǎn)化生長因子-β1介導(dǎo)的成纖維細胞增殖中的作用及細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號通路的研究。
　　 方法:
　　 1.利用包皮環(huán)切術(shù)切除的正常青少年包皮組織，體外分離培養(yǎng)人正常皮膚原代成纖維細胞，采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型膠原染色進行成纖維細胞的鑒定。
　　 2.實驗分為3部分：
　　 (1)

2、實驗一：TGF-β1濃度處理組，采用不同濃度的TGF-β1分別處理各組成纖維細胞，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組細胞增殖情況；
　　 (2)實驗二：分為:①TGF-β1濃度組：10.0ng/ml、5.0ng/ml、1.0ng/ml及0ng/ml。②時間組：給予10.0ng/ml的TGF-β1刺激細胞，分別在不同時間0min、15min、30min、60min及120min的時間點提取蛋白。應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(wester

3、n blot)法測定各組磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)的變化。
　　 (3)實驗三：對照組、TGF-β11.0ng/ml、10.0ng/ml、IPL照射劑量72J/cm2組、72J/cm2+TGF-β110.0ng/ml、PD98059+72J/cm2組、PD98059+TGF-β110.0ng/ml組及PD98059+72J/cm2+TGF-β110.0ng/ml組分別處理成纖維細胞后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢

4、測各組細胞增殖情況；應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)法測定各組磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外培養(yǎng)成纖維細胞經(jīng)Ⅰ、Ⅲ型膠原染色陽性，角蛋白染色陰性，細胞具有成纖維細胞形態(tài)。
　　 2.1成纖維細胞經(jīng)不同濃度轉(zhuǎn)化生長因子-β1作用后，與對照組比較，各組濃度的TGF-β1分別處理24及48小時后，0.01 ng/ml、0.1ng/ml、1.0ng/ml、50.

5、0ng/ml的TGF-β1對成纖維細胞增殖活性均無顯著增加，在TGF-β1濃度為10.0ng/ml時，細胞增殖活性較對照組顯著增高。
　　 2.2與對照組相比：TGF-β1各濃度組及時間組p-ERK蛋白表達均有差異，隨著TGF-β1劑量的增加和作用時間的延長，其磷酸化ERK蛋白表達水平逐漸增強，在TGF-β110.0ng/ml時p-ERK表達達高峰，在15分鐘時，磷酸化ERK蛋白表達水平開始增加，在60分鐘時p-ERK表達水平達

6、高峰。120分鐘時p-ERK表達有所衰減。
　　 2.3在抑制劑干預(yù)組中，與對照組相比：在IPL照射及TGF-β1作用24及48小時后，TGF-β110.0ng/ml、IPL照射劑量72J/cm2組和72J/cm2+TGF-β110.0ng/ml組成纖維細胞增殖活性明顯增加，其磷酸化ERK表達水平亦增加。而PD98059+TGF-β110.0ng/ml、PD98059+72J/cm2較對照組細胞增殖活性降低，但其磷酸化ERK表達