貓運動區(qū)皮質(zhì)伽瑪?shù)墩丈浜蠹毎蛲雠c病理形態(tài)學變化的研究.pdf

1、目的：目前，應(yīng)用伽瑪?shù)吨委煱d癇的病例越來越多，臨床上雖然取得一定效果，但尚有爭議，尤其在伽瑪?shù)吨委煱d癇方面的放射生物學的基礎(chǔ)研究比較薄弱。本實驗以健康貓的腦額葉運動區(qū)皮質(zhì)作為照射靶點，給予不同的伽瑪?shù)墩丈鋭┝?，觀察照射后不同時間點腦額葉運動區(qū)皮質(zhì)的形態(tài)學變化、細胞凋亡和bcl-2蛋白的表達情況，探討γ射線誘發(fā)細胞凋亡的時間與劑量效應(yīng)的關(guān)系及其分子機制，為臨床上伽瑪?shù)吨委煿δ軈^(qū)癲癇、腫瘤等疾病選擇合適治療劑量，減少放射性腦損傷提供了理論和

2、實驗的依據(jù)。 方法：選用健康家貓96只，雌雄不限，體重2500～3500克。分為正常對照組、伽瑪?shù)?5Gy照射組和伽瑪?shù)?0Gy照射組，每組32只；觀察時間點為伽瑪?shù)墩丈浜?d、2d、3d、7d、14d，共五個時間點。每一組每一個時間點隨機選取6只健康家貓，正常對照組動物不進行伽瑪?shù)墩丈?，另兩組動物分別給予不同劑量伽瑪?shù)墩丈?，于上述不同時間點處死后，取腦組織制成石蠟切片，然后，用免疫組化的方法檢測bcl-2蛋白，用原位末端標記法

3、(TUNEL法)檢測腦細胞凋亡。另外，于照射后14d，每組選取2只動物進行MRI檢查后，取標本進行透射電子顯微鏡觀察超微組織結(jié)構(gòu)改變。所有的數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(x±s)，用SAS統(tǒng)計軟件進行分析比較，以P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1 動物一般情況：所有試驗動物均在伽瑪?shù)墩丈浜?～8小時后完全清醒，逐漸恢復飲食，未出現(xiàn)肢體偏癱等癥狀，50Gy照射組動物1周內(nèi)精神萎靡，攝食較差，活動少，1周后恢復正常。

4、 2 MRI觀察大腦影像學改變：15Gy和50Gy照射組動物于照射后14d時行MRI掃描，均未發(fā)現(xiàn)明顯的壞死病灶。 3 光鏡下腦細胞形態(tài)改變：15Gy照射組動物伽瑪?shù)缎g(shù)后14d內(nèi)光鏡下未見到神經(jīng)元變性改變，50Gy伽瑪?shù)缎g(shù)后14d內(nèi)光鏡下可見神經(jīng)元變性，噬神經(jīng)細胞現(xiàn)象。 4 透射電鏡細胞形態(tài)觀察結(jié)果：15Gy照射組2周時電鏡下神經(jīng)元細胞核形態(tài)正常，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。50Gy照射組電鏡下出現(xiàn)神經(jīng)元核內(nèi)液泡，核固縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基

5、復合體擴張。 5 腦細胞凋亡改變：(1)伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后細胞凋亡呈增加的趨勢。與對照組比較，15Gy和50Gy照射組在照射后各個時間點，凋亡細胞的陽性表達率均有增高，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異有顯著性(P<0.05)。(2)每一個伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后不同時間點凋亡細胞的動態(tài)表達有一定的規(guī)律性，即照射后1d，凋亡細胞陽性表達即開始升高，2d達到最高峰，以后逐漸降低，到14d時仍高于正常對照組。(3)對每一個時間點，凋亡細胞的陽性表達與

6、照射劑量有一定相關(guān)性，照射劑量越高，凋亡細胞表達的越明顯。50Gy照射組凋亡細胞的陽性表達率均高于15Gy照射組，經(jīng)q檢驗，兩個照射組只有在照射后2d，凋亡細胞的陽性表達率差別有顯著性(P<0.05)。 6 腦細胞bcl-2蛋白表達水平改變：(1)伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后bcl-2陽性表達率呈降低的趨勢。與對照組比較，15Gy和50Gy照射組在照射后各個時間點，bcl-2蛋白的陽性表達率均低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異有顯著性(P<

7、0.05)。(2)每一個伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后不同時間點bcl-2蛋白的動態(tài)表達有一定的規(guī)律性，即照射后1d，bcl-2蛋白表達即開始降低，2d達到最低值，以后逐漸回升，到14d時仍低于正常對照組。(3)對同一個時間點，bcl-2蛋白的陽性表達與照射劑量有一定相關(guān)性，照射劑量越高，bcl-2蛋白降低的越明顯。50Gy照射組bcl-2蛋白的陽性表達均低于15Gy照射組但經(jīng)兩兩比較q檢驗，差別無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：

8、 1 邊緣劑量15Gy，等劑量曲線50％屬于伽瑪?shù)吨委煹陌踩珓┝?；邊緣劑?0Gy，等劑量曲線50％照射14d可引起神經(jīng)元變性，其長期改變有待更深入地研究。 2 本研究提示15Gy照射組術(shù)后引起放射性腦損傷的機率較低，為臨床上應(yīng)用低劑量(邊緣劑量10～15Gy，等劑量曲線40～60％)伽瑪?shù)吨委煱d癇提供了理論和實驗依據(jù)。 3 伽瑪?shù)墩丈湄堈ｎ~葉運動區(qū)皮質(zhì)14d內(nèi)，細胞凋亡數(shù)量的改變與照射劑量呈正相關(guān)；腦細胞bcl-2蛋