大鼠生后早期腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、研究背景及目的：小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia）是廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）各部位的一類(lèi)細(xì)胞，其數(shù)量占CNS膠質(zhì)細(xì)胞總數(shù)的5-20%。關(guān)于小膠質(zhì)細(xì)胞的起源，目前仍有爭(zhēng)議。少數(shù)人認(rèn)為，小膠質(zhì)細(xì)胞起源于外胚層。也有人認(rèn)為，小膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)源于骨髓造血干細(xì)胞。Hortega的經(jīng)典見(jiàn)解認(rèn)為，此種細(xì)胞來(lái)源于中胚層，是胚胎發(fā)育后期開(kāi)始形成血管時(shí)侵入腦內(nèi)的。 小膠質(zhì)細(xì)胞是CNS固有的免疫成分細(xì)胞

2、，正常情況下處于靜止?fàn)顟B(tài)，缺乏吞噬功能，但具有吞飲功能和一定的遷移能力。小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育是必需的，在發(fā)育過(guò)程的一定時(shí)期內(nèi)會(huì)出現(xiàn)過(guò)量發(fā)育的神經(jīng)細(xì)胞凋亡，小膠質(zhì)細(xì)胞起著清除死亡細(xì)胞和物質(zhì)碎片的作用。靜息狀態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞為分支狀，胞體小，具有伸向各個(gè)方向的細(xì)胞突起，周?chē)h(huán)境的改變可激活小膠質(zhì)細(xì)胞使其發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，由分支狀變?yōu)橥黄鹕俣痰墓嗄緲蛹?xì)胞，并移至受損神經(jīng)細(xì)胞附近。小膠質(zhì)細(xì)胞還可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化，胞體呈圓形，突起消失，呈“阿

3、米巴樣”并具有吞噬細(xì)胞功能。小膠質(zhì)細(xì)胞活化是CNS在許多病理?xiàng)l件下，有時(shí)甚至是非常微弱刺激作用下的常見(jiàn)反應(yīng)，表現(xiàn)為小膠質(zhì)細(xì)胞在局部不同程度的增生與聚集，同時(shí)常伴有細(xì)胞形態(tài)、免疫表型與功能等一系列的變化。小膠質(zhì)細(xì)胞每種形態(tài)與其相應(yīng)的功能相對(duì)應(yīng)。目前小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化與細(xì)胞內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄以及功能變化之間的聯(lián)系還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒(méi)有被人們所認(rèn)識(shí)。 本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察大鼠生后早期腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)、進(jìn)入CNS的途徑、遷移的方式以及與時(shí)間的關(guān)聯(lián)性

4、，為小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)變化與不同功能的對(duì)應(yīng)關(guān)系提供一定的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)材料與方法：選用Sprague-Dawley（SD）大鼠生后1d（postnatalday1，P1），3d，10d，14d，21d各3只，雌雄不限。對(duì)于鼠齡為1d和3d的大鼠，快速斷頭取出全腦，直接浸泡于4%多聚甲醛液中固定12h，而對(duì)于鼠齡等于或大于10d的大鼠，以4%水合氯醛（1ml/100g）腹腔注射麻醉后，常規(guī)灌流固定，完整取出腦組織，4%多聚甲醛后

5、固定12h后，依次用20%和30%的蔗糖梯度脫水各2d，直至腦組織完全沉底。使用恒冷冰凍切片機(jī)切腦片，片厚10μm。腦組織切片分別行尼氏染色觀察腦組織結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)OX-42陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)果：1、SD大鼠生后早期（P1-P21，哺乳期）大腦小膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)歷了動(dòng)態(tài)的形態(tài)學(xué)變化過(guò)程。生后1-2周（P1、P3、P10和P14），白質(zhì)區(qū)（扣帶、胼胝體、內(nèi)囊和外囊等部位）可見(jiàn)圓形、阿米巴樣、初級(jí)分支狀細(xì)胞，數(shù)量由少到多，至

6、P10達(dá)高峰；灰質(zhì)區(qū)（海馬和皮層等）細(xì)胞呈多形性改變，以初級(jí)分支狀細(xì)胞為主，數(shù)量逐漸增多。2、生后21天（斷乳期），白質(zhì)仍可見(jiàn)初級(jí)分支狀細(xì)胞，灰質(zhì)僅見(jiàn)成熟細(xì)胞，數(shù)量最多。3、小腦中小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化過(guò)程與大腦相似。4、本實(shí)驗(yàn)觀察到小膠質(zhì)細(xì)胞遷移入腦的路徑主要有腦室、腦膜和血管路徑。遷移方式為“切線(xiàn)式”遷移和“放射狀”遷移。 結(jié)論：1、SD大鼠生后早期小膠質(zhì)細(xì)胞一直處于連續(xù)的、動(dòng)態(tài)的發(fā)育過(guò)程，至P21接近成熟。2、在此階段，阿米