內(nèi)皮細胞原代培養(yǎng)和伊曲替酸調(diào)控的研究.pdf

1、銀屑病是一種常見并易復(fù)發(fā)的慢性炎癥性皮膚病。由于本病發(fā)病率較高，易于復(fù)發(fā)，病程較長，尤以侵犯青壯年為多，故對患者的身體健康和精神影響甚大。因此，銀屑病是當前皮膚科領(lǐng)域內(nèi)重點研究的疾病之一。隨著近年來腫瘤血管新生(angiogenesis)在癌癥研究和臨床腫瘤治療學(xué)方面取得的積極成果，使人們對非腫瘤性血管新生性疾病也表現(xiàn)出了極大的興趣。根據(jù)銀屑病皮損的組織病理特征之一是真皮乳頭層微血管擴張和內(nèi)皮細胞增生，針對真皮內(nèi)血管新生與銀屑病關(guān)系的研

2、究成為其發(fā)病機理研究的新方向之一，并且有許多學(xué)者試圖通過抑制血管新生而達到治療銀屑病的目的。本研究通過原代培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞，從體外實驗的角度探討維A酸類藥物伊曲替酸對內(nèi)皮細胞增殖的調(diào)控作用，以及對內(nèi)皮細胞周期的影響，從而進一步探討通過藥物抑制血管新生，來達到治療銀屑病的目的。 本實驗分為三個部分，第一部分為原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細胞，并從直接顯微鏡下觀察形態(tài)和第Ⅷ因子相關(guān)抗原(ⅧRA)的免疫組化染色鑒定細胞；第二部分采用MTr比色法

3、檢測伊曲替酸在不同作用時間和不同濃度，對內(nèi)皮細胞、角質(zhì)形成細胞以及ECV-304細胞株的增殖調(diào)控；第三部分采用流式細胞技術(shù)檢測伊曲替酸在不同作用時間和不同濃度，對內(nèi)皮細胞和角質(zhì)形成細胞的細胞周期的影響。 研究結(jié)果顯示：(1)原代培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細胞在顯微鏡下表現(xiàn)為單層生長的多角形細胞，有典型的“鋪路石”形態(tài)，ⅧRA免疫組化染色見到細胞漿內(nèi)陽性的棕褐色顆粒；(2)伊曲替酸對內(nèi)皮細胞增殖的作用表現(xiàn)為，隨著藥物濃度的逐漸升高，先促進細

4、胞增殖，到一定濃度則呈抑制作用，是雙向調(diào)控趨勢。而對角質(zhì)形成細胞和ECV-304則表現(xiàn)為直接抑制的作用。并且伊曲替酸對內(nèi)皮細胞和角質(zhì)形成細胞的作用隨著作用時間的延長而更加顯著；(3)伊曲替酸對內(nèi)皮細胞和角質(zhì)形成細胞的細胞周期有完全不同的影響，使內(nèi)皮細胞的周期阻滯于G1期，而角質(zhì)形成細胞則被阻滯于S期；(4)伊曲替酸對ECV-304作用與作用在角質(zhì)形成細胞相一致，表現(xiàn)為直接抑制增殖，而與血管內(nèi)皮細胞的作用不相一致。 本實驗結(jié)論：人