脂肪干細(xì)胞原代培養(yǎng)及成肌誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討大鼠脂肪干細(xì)胞（adipose derived stem cells，ADSCs）的分離、培養(yǎng)及成肌誘導(dǎo)，為成肌細(xì)胞尿道括約肌注射治療壓力性尿失禁探索新的種子細(xì)胞。 方法：取SD大鼠腹股溝處脂肪，機(jī)械剪碎后通過(guò)酶消化法分離、培養(yǎng)得到脂肪干細(xì)胞。通過(guò)對(duì)脂肪干細(xì)胞相關(guān)抗原CD90、CD105和造血干細(xì)胞相關(guān)抗原CD34的檢測(cè)，證明其干細(xì)胞特性。取培養(yǎng)至第2代，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行成肌誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分成誘導(dǎo)組和對(duì)照組，分

2、別用誘導(dǎo)培養(yǎng)液和基礎(chǔ)培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。誘導(dǎo)培養(yǎng)液為含10μmol/L 5-氮雜胞苷（5-azacytidine，5-Aza）、5％FBS（胎牛血清）和5％馬血清的DMEM培養(yǎng)液，而對(duì)照組所用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液為只含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)期間誘導(dǎo)組和對(duì)照組給予相同的處理。誘導(dǎo)時(shí)間分為7天、14天、21天、28天和35天，誘導(dǎo)期間通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和形態(tài)變化。誘導(dǎo)結(jié)束后通過(guò)免疫熒光和流式細(xì)胞儀檢測(cè)成肌細(xì)胞特異性抗原結(jié)蛋

3、白（Desmin）和肌球蛋白（Myosin）的表達(dá)情況，檢測(cè)誘導(dǎo)結(jié)果。 結(jié)果：通過(guò)酶消化法可以從大鼠腹股溝脂肪中分離、培養(yǎng)出ADSCs。相關(guān)的CD分子檢測(cè)證明其具有干細(xì)胞特性。對(duì)培養(yǎng)至第2代的ADSCs，使用含10μmol/L 5-Aza的誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)行成肌誘導(dǎo)培養(yǎng)，28天后細(xì)胞整體表現(xiàn)出成肌細(xì)胞特有的“漩渦”樣生長(zhǎng)形態(tài)，單個(gè)細(xì)胞表現(xiàn)出多核化。免疫熒光和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示Desmin和Myosin的表達(dá)率在誘導(dǎo)28天時(shí)達(dá)最高