蚯蚓纖溶酶對(duì)肝癌細(xì)胞增殖及CD44v6表達(dá)影響的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：探討蚯蚓纖溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme，EFE）對(duì)人肝癌細(xì)胞的增殖是否具有抑制作用，及其對(duì)粘附分子CD44v6表達(dá)的影響。 方法：（1）體外實(shí)驗(yàn)：體外培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，分為對(duì)照組和不同濃度EFE組，采用WST-1法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率，并采用RT-PCR方法檢測(cè)CD44v6mRNA的表達(dá)情況，Western Blot法觀察各組細(xì)胞CD44v6蛋白表達(dá)的變化。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：

2、建立SMMC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分為生理鹽水組、EFE組、5-Fu組及EFE+5-Fu聯(lián)合用藥組，分別處理4周后，剝離腫瘤組織，計(jì)算瘤重抑制率；并采用RT-PCR方法檢測(cè)EFE組CD44v6 mRNA的表達(dá)情況，免疫組化和Western Blot方法觀察各組EFE對(duì)CD44v6蛋白表達(dá)的影響。同時(shí)進(jìn)行肝腎組織HE染色，評(píng)價(jià)藥物毒副反應(yīng)。 結(jié)果：（1）體外實(shí)驗(yàn)：EFE作用于SMMC-7721細(xì)胞株24、48、72小時(shí)

3、的IC50分別為7．86、5．67、4．23 uku/ml，細(xì)胞增殖抑制率結(jié)果提示EFE對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用在一定濃度范圍內(nèi)呈時(shí)間劑量依賴關(guān)系。RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，3、4、5 uku/ml濃度的EFE作用48h后，CD44v6 mRNA表達(dá)量分別下調(diào)14．56％、27．11％、38．70％，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0．01）。Western Blot結(jié)果表明，3、4、5 uku/ml濃度的EFE作用4

4、8h后，CD44v6蛋白的表達(dá)量與對(duì)照組相比分別下調(diào)14．47％、31．07％、56．60％，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0．05）。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：與生理鹽水組相比，EFE組、5-Fu組及聯(lián)合用藥組抑瘤率分別為20．53％、23．07％和54．20％；免疫組化和Western Blot結(jié)果顯示，EFE組CD44v6蛋白的表達(dá)水平較生理鹽水組分別下調(diào)47．16％、28．37％（P均<0．05）。RT-PCR結(jié)果表明，EFE組CD44v6