膜-細胞骨架連接分子Ezrin及CD44v6對胃癌生長和轉移的影響.pdf

1、前言
　　 Ezrin屬于ERM（Ezrin-Radixin-Moesin）家族成員之一，其編碼基因位于染色體6q25-q26，ERM蛋白的C末端與細胞骨架的actin相連，N末端通過與細胞表面的粘附分子Cadherin，CD44等粘附因子相連，通過調節(jié)細胞-細胞，細胞-間質的粘附性來影響腫瘤的侵襲性。Ezrin蛋白首先在1981年在雞的腸上皮絨毛中發(fā)現，它富含于含肌動蛋白的細胞絨毛和細胞膜的皺襞中并參與上皮細胞的膜動力學。Ez

2、rin蛋白幾乎存在于任何細胞中，在胃，小腸，肺，胰腺和腎組織有較高的表達。在脾，胸腺，淋巴結和骨髓中有中等表達。在心臟，睪丸和肌肉中有較低表達。在正常組織中Ezrin蛋白參與形成細胞表面結構的形成如偽足和絨毛等，并形成細胞與細胞，細胞與基質的粘附，細胞間信號的傳導和細胞的運動。近年來的研究發(fā)現Ezrin基因的表達在腫瘤的發(fā)生，浸潤和轉移中也起到重要作用。檢測正常胃粘膜，非典型增生，胃癌和轉移淋巴結中Ezrin和CD44v6蛋白和基因表達

3、，并分析其在不同病例中的表達的差異和聯系。討論Ezrin和CD44v6的蛋白和mRNA表達與胃癌浸潤和轉移的關系和意義。
　　 材料和方法
　　 收集中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院2008年10月-2009年6月手術切除胃癌標本84例（其中每例標本距離腫瘤邊緣5厘米以上正常胃粘膜做對照）每個病例及對照均石蠟包埋，4微米連續(xù)切片，并行HE染色。
　　 免疫組織化學染色及結果判定：用S-P免疫組織化學方法檢測正常胃粘膜組、

4、胃癌組、轉移淋巴結組中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的表達。鼠抗人Ezrin蛋白單克隆抗體（工作濃度1:300）購自SANDA公司，鼠抗人CD44v6單克隆抗體（工作濃度為1:200）購自北京博奧森生物技術有限公司。結果的判斷方法，按照Birneretal報道的方法隨即選擇5個高倍鏡視野（x400）每個視野計數200個細胞，共1000個細胞，陽性細胞少于或等于10％為陰性；無論其染色強度如何均記為0分；陽性細胞11-50％記為2分；陽

5、性細胞51-80％記為3分；陽性細胞為>80％記為4分。根據顯色分弱顯色1分；中等為2分；高強度為3分，細胞陽性表達<10％（-），以上兩組相加3分（+）；4-5分（++）；6-7分（+++）。RT-PCR熒光定量結果根據△CT=（實驗組-內參組）-（對照組-內參組）值大小來判斷胃癌組織中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白mRNA表達量。
　　 結 果
　　 Ezrin蛋白表達在細胞漿中，胃癌組織中的陽性表達率為（84.5

6、％）；正常胃粘膜Ezrin蛋白陽性表達率為（61.9％）；轉移淋巴結Ezrin蛋白陽性表達率為（88％），病例組與對照組有統(tǒng)計學差異，P<0.05。在病例組的組織學分型中高分化胃癌Ezrin蛋白的陽性表達率為（93.8％）；低分化胃癌中Ezrin蛋白的陽性表達率為（71.4％）；兩分型P<0.05，有差異。在病例組有淋巴結轉移和無淋巴結轉移及Bormann分型中的陽性表達的陽性率也有差異，P<0.05。
　　 CD44v6蛋白表

7、達在細胞膜，胃癌組織中的陽性表達率為（75％）；正常胃粘膜CD44v6蛋白陽性表達率為（51.2％）；轉移淋巴結CD44V6蛋白陽性表達率為（78％），病例組與對照組有統(tǒng)計學差異，P<0.05。在病例組的組織學分型中高分化胃癌CD44v6蛋白的陽性表達率為（81.6％）；低分化胃癌中CD44v6蛋白的陽性表達率為（65.7％）；兩分型P<0.05，有差異。在病例組有淋巴結轉移和無淋巴結轉移中P<0.05。
　　 RT-PCR實驗

8、結果，熒光定量結果根據△CT=（實驗組-內參組）-（對照組-內參組）值大小來判斷胃癌組織中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的mRNA的表達量。結果顯示胃癌組織中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白mRNA的表達明顯高于正常胃粘膜的對照組。
　　 結 論
　　 Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的表達在胃癌組中明顯高于正常胃粘膜，提示Ezrin和CD44v6的表達可能參與了胃癌的生長過程。伴淋巴結轉移胃癌組中Ezrin蛋白的表達