蚯蚓纖溶酶抑制胃癌細(xì)胞粘附及誘導(dǎo)凋亡的研究.pdf

1、目的：研究蚯蚓纖溶酶對(duì)胃癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附性及粘附分子CD44v6表達(dá)的影響，初步探討蚯蚓纖溶酶是否具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。同時(shí)觀察蚯蚓纖溶酶有無(wú)抑制胃癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用。 方法：(1)采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色分析法觀察蚯蚓纖溶酶對(duì)人胃癌細(xì)胞株MGCS03增殖的影響。(2)蚯蚓纖溶酶各實(shí)驗(yàn)組作用于胃癌細(xì)胞48小時(shí)后，采用體外粘附實(shí)驗(yàn)觀察蚯蚓纖溶酶對(duì)胃癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附性的影響，流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)染

2、色法觀察蚯蚓纖溶酶作用于MGC803細(xì)胞后CD44v6蛋白表達(dá)的變化，采用RT-PCR方法檢測(cè)藥：物作用細(xì)胞后CD44v6 mRNA表達(dá)水平的變化。(3)蚯蚓纖溶酶各實(shí)驗(yàn)組作用于MGC803細(xì)胞48小時(shí)后，DNA凝膠電泳技術(shù)觀察凋亡細(xì)胞變化，流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡率的變化，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察蚯蚓纖溶酶對(duì)p53蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：(1)蚯蚓纖溶酶各用藥組(濃度分別為1、2、4、6、8 uku/ml)對(duì)MGC803細(xì)胞均有抑

3、制生長(zhǎng)作用(P<0.01)，且在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴(lài)關(guān)系。(2)蚯蚓纖溶酶各實(shí)驗(yàn)組作用于MGC803細(xì)胞48小時(shí)后，與對(duì)照組相比，胃癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附性下降(P<0.01)。流式細(xì)胞術(shù)及免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察到CD44v6蛋白表達(dá)水平下降(P<0.01)，RT-PCR結(jié)果顯示各實(shí)驗(yàn)組CD44v6 mRNA表達(dá)水平下降(P<0.01)，并呈劑量依賴(lài)性。(3)蚯蚓纖溶酶作用于胃癌細(xì)胞48小時(shí)后，DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察到典型梯狀條