高濃度葡萄糖對胰島細(xì)胞凋亡和GLUT2、IRS-1、IRS-2 mRNA表達(dá)的影響的研究.pdf

1、第一部分:高濃度葡萄糖對胰島細(xì)胞凋亡的研究
　　目的:探討不同濃度葡萄糖對胰島細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:通過膠原酶P消化、Ficoll400純化得到的成年SD大鼠胰島細(xì)胞,經(jīng)RPMI-1640培養(yǎng)2天貼壁后,改用含不同濃度葡萄糖的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)5天,鋪成單層。通過放免法測定上清液中胰島素含量;AO/EB染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化;Tunel法計(jì)算細(xì)胞凋亡率;收集各組細(xì)胞,采用TRIzol試劑RNA提取法分別提取各組

2、細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測Bcl-2及Bax mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果:11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)液中胰島素分泌量升高(P<0.05),兩組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。26.7mmol/L葡萄糖組胰島素分泌量減少( P<0.05)。11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組、26.7mmol/L葡萄糖組均可引起胰島細(xì)胞凋亡率增加,26.7mm

3、ol/L葡萄糖組還可引起胰島細(xì)胞壞死。11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組、26.7mmol/L葡萄糖組都可引起胰島細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)減少,Bax mRNA表達(dá)增加(P<0.05),但三組間無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:(1)、11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組可促進(jìn)胰島細(xì)胞凋亡。(2)、26.7mmol/L葡萄糖組可促進(jìn)胰島細(xì)胞凋亡,還可引起胰島細(xì)胞壞死。(3)

4、、11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組、26.7mmol/L葡萄糖組胰島細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與Bcl-2mRNA表達(dá)減少,Bax mRNA表達(dá)增加有關(guān)。
　　第二部分:高濃度葡萄糖對胰島細(xì)胞GLUT2、胰島素受體底物-1和-2(IRS-1和-2)mRNA表達(dá)的影響
　　目的:探討不同濃度葡萄糖對胰島細(xì)胞GLUT2、IRS-1和-2mRNA表達(dá)的影響。
　　方法:通過膠原酶P消化,Ficoll400純

5、化得到的成年SD大鼠胰島細(xì)胞,經(jīng)RPMI-1640培養(yǎng)2天后,改用含不同濃度葡萄糖的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)4天,鋪成單層。收集各組細(xì)胞,采用TRIzol試劑RNA提取法分別提取各組細(xì)胞總RNA,RT-PCR技術(shù)檢測各組GLUT2、IRS-1和-2mRNA表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組GLUT2mRNA表達(dá)增加(P<0.05),但兩組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。26.

6、7mmol/L葡萄糖組GLUT2mRNA表達(dá)無明顯改變(P>0.05)。11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組、26.7mmol/L葡萄糖組IRS-1和-2mRNA表達(dá)明顯減少(P<0.05),但三組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:(1)、11.1mmol/L葡萄糖組、22.2mmol/L葡萄糖組GLUT2mRNA表達(dá)增加;(2)、26.7mmol/L葡萄糖組GLUT2 mRNA表達(dá)無改變;(3