表達人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7的骨髓基質(zhì)細胞修復骨缺損的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　本研究利用CHO表達系統(tǒng)得到了BMP-7高表達細胞株，實驗證明CHO細胞能夠分泌有體外誘骨活性的BMP-7蛋白。而實現(xiàn)基因治療的關鍵在于目的基因的高效轉(zhuǎn)移并適度表達。腺病毒載體是近年來用于基因治療最多的病毒載體之一，它可感染多種細胞，而且不整合到宿主基因組中，表達持續(xù)的時間短，這正是局部成骨所需要的。本研究利用了腺病毒的這一特性，嘗試用基因治療的方法使BMP-7在骨缺損局部持續(xù)分泌表達，驗證其加快骨愈合過程的能力。　　第一部分：B

2、MP-7全長序列的獲得和相關表達載體的構(gòu)建：　　結(jié)論：成功得到了與GeneBank報道序列完全一致的BMP-7cDNA，構(gòu)建了正確的真核表達載體及重組腺病毒載體，為深入研究BMP-7的生物特性提供了重要的研究基礎?！　〉诙糠郑汉Y選穩(wěn)定表達hBMP-7的CHO細胞克隆：　　結(jié)論：篩選出穩(wěn)定表達BMP-7的CHO細胞株，所分泌的BMP-7蛋白分子量為32-36kDa；利用特異敏感的ELISA方法精確定量出BMP-7的單細胞分泌量，根

3、據(jù)ELISA標準曲線，CHO細胞分泌BMP-7的水平最高可達15mg/l；建立了靈敏的體外測活方法，結(jié)果顯示在BMP-7的作用下，ALP的合成呈劑量依賴性和時間依賴性。　　第三部分：兔骨缺損模型的建立及AdCMV-BMP-7修復骨缺損的實驗研究：　　結(jié)論：本研究成功分離、純化了兔骨髓基質(zhì)細胞，作為具有分化能力的前體細胞，MSCs在外源BMP-7作用下，胞內(nèi)ALP合成增多，提示其向成骨方向分化，并且在接受BMP-7刺激信號后可分泌BM

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