肺心病患者血清對(duì)兔肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響.pdf

1、　　目的：觀察不同濃度肺心病患者血清對(duì)體外培養(yǎng)兔肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞DNA合成、損傷及乳酸脫氫酶(LDH)釋放、一氧化氮(NO)合成、內(nèi)皮素(ET)分泌的影響。為進(jìn)一步深入了解肺心病的發(fā)生、發(fā)展提供幫助。　　方法：內(nèi)皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng)參照J(rèn)affe方法[1]加以改進(jìn)。用膠原酶I消化兔肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(Rabbitpulmonaryarteryendothelialcells，RPAECs)，用PRIM-含10％胎牛血清1640培養(yǎng)基培養(yǎng)、傳代

2、。分離得到內(nèi)皮細(xì)胞(endothelialcell，EC)經(jīng)倒置相差顯微鏡下觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)，免疫組化檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原鑒定內(nèi)皮細(xì)胞。選擇第4-6代EC進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將血管內(nèi)皮細(xì)胞與不同濃度(2.5％，5％，10％，15％，20％)肺心病患者血清培養(yǎng)基共同孵育12h，應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況；應(yīng)用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)RPAECs的DNA損傷程度；通過(guò)紫外連續(xù)檢測(cè)法、放射免疫法、硝酸還原酶法分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中LDH、E

3、T、NO等指標(biāo)觀察RPAECs分泌功能的變化?！　〗Y(jié)論：高濃度肺心病患者血清對(duì)RPAECs有損傷，導(dǎo)致細(xì)胞核的破壞，細(xì)胞壞死和凋亡，使細(xì)胞內(nèi)DNA出現(xiàn)損傷，且抑制DNA合成，細(xì)胞增殖速度明顯減慢部分細(xì)胞脫落死亡。高濃度的肺心病患者血清對(duì)細(xì)胞有傷害作用，濃度越高，細(xì)胞外培養(yǎng)液中LDH活力上升越明顯。通過(guò)NO、ET的變化證明高濃度肺心病患者血清可能對(duì)RPAECs影響功能產(chǎn)生影響。EC受損，NO合成減少，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增殖，從而使血管壁