產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的篩選及對(duì)對(duì)蝦防腐效果的初步研究.pdf

1、本研究采用稀釋涂布法對(duì)湛江南海海域采集的10種海洋動(dòng)物腸道進(jìn)行乳酸菌分離及多相分類鑒定；利用牛津杯打孔法篩選具有抗菌活性的乳酸菌，并通過排除菌株發(fā)酵液有機(jī)酸、過氧化氫物的抑菌作用，以及蛋白酶敏感性實(shí)驗(yàn)篩選出產(chǎn)乳酸菌素的乳酸菌。對(duì)產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的生物學(xué)特性及其乳酸菌素的性質(zhì)進(jìn)行研究，用浸泡保鮮方式將乳酸菌素粗品應(yīng)用于南美白對(duì)蝦的防腐保鮮，并對(duì)保鮮防腐效果進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。主要結(jié)果如下：
　　（1）10種海洋動(dòng)物腸道中共分離出159產(chǎn)生

2、溶鈣圈的疑似乳酸菌，進(jìn)而從中初篩出43株具有抗菌活性的乳酸菌。經(jīng)形態(tài)學(xué)和生理生化特性鑒定，43株乳酸菌分別屬于乳桿菌屬（Lactobacillus）、乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、明串株菌屬(Leuconostoc)、片球菌屬(Pediococcus)5個(gè)菌屬。從中挑選出13株具有抑菌譜廣、抑菌能力強(qiáng)并具有菌屬代表性的菌株，進(jìn)行16S rRNA基因序列鑒定，其中堅(jiān)強(qiáng)腸球菌( Enterococ

3、cus durans)2株，乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp.lactis）2株，融合魏斯氏菌（Weissella confusa）1株，戊糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus)2株，格氏乳球菌（Lactococcus garvieae）3株，檸檬色明串株球菌（Leuconostoc citreum）2株；戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)1株。
　　

4、（2）從43株具有抗菌活性的乳酸菌中挑選出39株具有抑制兩種或兩種以上指示菌生長的乳酸菌，對(duì)其濃縮發(fā)酵液進(jìn)行有機(jī)酸、過氧化氫物排除實(shí)驗(yàn)，篩選出2株疑似產(chǎn)乳酸菌素菌株ZH-54、LY-87，并對(duì)其進(jìn)行蛋白酶敏感性實(shí)驗(yàn)。菌株ZH-54經(jīng)胰蛋白酶、蛋白酶 K處理后的發(fā)酵液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈比未處理的抑菌圈明顯變小，菌株LY-87經(jīng)木瓜蛋白酶、蛋白酶K處理后的抑菌圈也明顯變小，表明這2株菌都能產(chǎn)生具有抑菌活性的蛋白或多肽類物質(zhì)，即乳酸菌素

5、。
　?。?）根據(jù)形態(tài)學(xué)、生理生化特性實(shí)驗(yàn)以及16S rRNA序列同源性分析，確定菌株ZH-54為堅(jiān)強(qiáng)腸球菌（Enterococcus durans），其16S rRNA序列在GeneBank的登錄號(hào)為JX258806；菌株LY-87鑒定為乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis），登錄號(hào)為JX258807。
　　（4）對(duì)菌株ZH-54、LY-87所產(chǎn)乳酸菌素Bact.54、Bact.

6、87的生物學(xué)特性研究表明，Bact.54有相當(dāng)好的熱穩(wěn)定性，在100℃處理15 min活性下降12.14％，121℃處理后活性僅下降18.50%；而Bact.87熱穩(wěn)定性較Bact.54差，經(jīng)100℃處理15min后，抑菌活性下降39.70%，121℃處理后，抑菌活性下降了61.76%。pH對(duì)Bact.54、Bact.87的影響十分顯著，隨著pH的升高，Bact.54、Bact.87的抑菌活性均逐漸下降，當(dāng)pH等于或大于7.0時(shí)抑菌活性

7、完全喪失。Bact.54對(duì)革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌均有抑菌活性，Bact.87只對(duì)革蘭氏陽性菌有抑菌作用。
　?。?）Bact.54、Bact.87對(duì)南美白對(duì)蝦防腐保鮮效果的研究表明，乳酸菌素Bact.54、Bact.87對(duì)南美白對(duì)蝦均具有明顯的保鮮作用，但 Bact.54的防腐保鮮效果要優(yōu)于Bact.87，Bact.54處理組的對(duì)蝦的保質(zhì)期比對(duì)照組延長了2-3天，而用Bact.87處理可延長1-2天；Bact.54、Bact.