缺氧條件下大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中活性氧對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子-1α和細(xì)胞增殖作用的研究.pdf

1、目的:1. 觀察在缺氧條件下,大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中活性氧（ROS）的變化趨勢(shì)。
　　 2. 探討在缺氧條件下，大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中ROS的變化是否調(diào)控缺氧誘導(dǎo)因子-1apha（HIF-1α）的表達(dá)，進(jìn)而影響平滑肌細(xì)胞的增殖。
　　 材料與方法：本實(shí)驗(yàn)采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（PASMCs），用胰蛋白酶消化法傳代細(xì)胞，并將PASMCs隨機(jī)分成3組：常氧組（21％O2，24小時(shí)，A組），缺氧組（5％O

2、2，24小時(shí)，B組），缺氧+Mn-TBAP組（5％O2，24小時(shí)，C組，Mn-TBAP是一種ROS的清除劑）。用激光共聚焦顯微鏡熒光染色法檢測(cè)不同組中細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度，從而反映細(xì)胞內(nèi)活性氧的表達(dá)水平；用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT-PCR）和免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶連接（SP）法分別測(cè)定不同組中HIF-1αmRNA和HIF-1α蛋白的表達(dá)水平；用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)不同組的細(xì)胞增殖程度。
　　 結(jié)果

3、:
　　 1. 缺氧組細(xì)胞中活性氧（69.59±3.50）比常氧組（27.39±2.25）明顯增加（n=6，P<0.05）；缺氧＋Mn-TBAP組細(xì)胞內(nèi)活性氧（41.09±2.47）低于缺氧組（n=6，P<0.05），但高于常氧組(n=6，P<0.05)。
　　 2.與常氧組（HIF-1αmRNA: 0.16±0.03,蛋白：186.46±5.13）比較，缺氧組HIF-1αmRNA(0.43±0.02)和蛋白（146.9

4、3±14.48）的表達(dá)明顯增強(qiáng)（n=6，P<0.05）；而缺氧＋Mn-TBAP組的HIF-1αmRNA(0.25±0.03)和蛋白（160.07±7.21）均比缺氧組減弱(n=6,P<0.05)，但仍比常氧組升高（n=6，P<0.05）。
　　 3. 缺氧組的平滑肌細(xì)胞增殖程度（0.20±0.01）比常氧組（0.12±0.01）顯著升高（n=6，P<0.05）；缺氧＋Mn-TBAP組的平滑肌細(xì)胞增殖程度（0.16±0.01）比缺

5、氧組有顯著的降低（n=6，P<0.05），但高于常氧組（n=6，P<0.05）。
　　 結(jié)論: 缺氧條件下，肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中ROS含量是增加的；缺氧可以使肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中HIF-1αmRNA和蛋白表達(dá)均明顯升高，同時(shí)促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖；當(dāng)減少肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中ROS含量時(shí)，能抑制上述缺氧對(duì)HIF-1α和平滑肌細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。這些說(shuō)明：1.在肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中，ROS可能作為一種信號(hào)分子參與缺氧感受信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；2. 在