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文檔簡介
1、目的:觀察在高濃度葡萄糖(11.1mmol/L)環(huán)境下,不同的胰島素劑量對大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)體系對大鼠肝細(xì)胞白蛋白基因表達(dá)的影響,并對相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討。方法:利用原位二步Ⅳ型膠原灌注法,Percoll液密度梯度離心法分離Wistar大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞;體外將肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與Kupffer細(xì)胞按6:1比例共同培養(yǎng),用11.1mmol/L葡萄糖處理該聯(lián)合培養(yǎng)體系,然后再用不同劑量的胰島素[胰島素(IU):
2、葡萄糖(g)=2:1,G1組;1:1,G2組;1:2,G3組;1:4,G4組]處理細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)體系,分別于處理后的4h、24h留取細(xì)胞培養(yǎng)上清液,檢測白蛋白濃度及IL-1、IL-6、TNF-α含量,提取肝細(xì)胞RNA,使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(RT-PCR)檢測白蛋白mRNA表達(dá)。結(jié)果:高濃度葡萄糖(11.1mmol/L)環(huán)境下,采用不同劑量胰島素進(jìn)行處理后的4h,24h細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)體系的細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-1、IL-6、TNF-α水平隨胰島
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