淫羊藿苷對(duì)Aβ-,25-35-所致AD大鼠學(xué)習(xí)記憶及膽堿能系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷(icariin,ICA)對(duì)β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-peptide25-35，Aβ25-35)所致原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的毒性、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)模型大鼠的學(xué)習(xí)、記憶及膽堿能系統(tǒng)的影響并探討其可能的作用機(jī)制，為其用于防治AD提供理論依據(jù)。 方法：原代培養(yǎng)乳鼠大腦皮層神經(jīng)元，以凝聚態(tài)的Aβ25-35(20μmolL-1)損傷神經(jīng)元，體外建立細(xì)胞毒性模型。設(shè)置空白

2、組、模型組、ICA低、中、高劑量組(0.25mg·L-1、0.5 mg·L-1、1.0 mg·L-1)、陽性對(duì)照組(Tacrine，THA0.5 mg·L-1)、協(xié)同組(THA0.5 mg·L-1+ICA 0.5 mg·L-1)，通過MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測(cè)細(xì)胞損傷程度、以及觀察其病理形態(tài)學(xué)的改變，評(píng)價(jià)ICA對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用；96只SD大鼠分為8組，分別為空白組、假手術(shù)組、模型組、I

3、CA低、中、高劑量組(30 mg·kg-1·d-1,60 mg·kg-1·d-1，120 mg·kg-1·d-1)、陽性對(duì)照組(THA10mg·kg-1·d-1)、協(xié)同組(THA 10mg·kg-1·d-1+ICA60 mg·kg-1·d-1)，海馬內(nèi)注射凝聚態(tài)Aβ25-35 10μg制備AD大鼠模型，連續(xù)灌胃給藥14天，Morris水迷宮檢測(cè)大鼠空間辨別學(xué)習(xí)記憶能力：化學(xué)法檢測(cè)大鼠海馬組織膽堿酯酶(acetylcholinestera

4、se，AChE)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)化酶(choline acetyltransferase，ChAT)的活性變化；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)AChE、ChAT、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受體酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)的mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：MTT，LDH結(jié)果顯示ICA對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元的損傷有明顯的抑制作用，且呈劑量依賴性。細(xì)胞經(jīng)Aβ2

5、5-35損傷后失去折光性，胞體輪廓模糊，突起減少或回縮、斷裂，HE檢測(cè)顯示模型組細(xì)胞還有核固縮、濃染等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，各給藥組損傷比模型組明顯減輕，僅見少部分細(xì)胞輕度腫脹，部分細(xì)胞胞漿皺縮；整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與模型組比較，ICA連續(xù)給藥14天可以明顯縮短大鼠在定位航行實(shí)驗(yàn)中的逃避潛伏期及搜索距離(P<0.05)，增加空間探索實(shí)驗(yàn)中大鼠在原安全島所在象限的搜索時(shí)間及原安全島所在象限游泳距離占總距離的百分比(P<0.05)；與模型組比較，

6、ICA中、高劑量組、協(xié)同組和陽性對(duì)照組均能抑制Aβ25-35損傷所致海馬、AChE活性的增高(ICA60mg·kg-1·d-1 P<0.05，ICA120 mg·kg-1·d-1、THA10 mg·kg-1·d-1、THA+ICA60 mg·kg-1·d-1P<0.01)，與陽性對(duì)照組比較，ICA低劑量組不能抑制AChE活性的增高(P<0.05)；與模型組比較，協(xié)同組及ICA中、高劑量組可以增加ChAT的活性，并促進(jìn)ChAT、BDNF及