淫羊藿苷對Aβ-,25-35-所致AD大鼠學(xué)習(xí)記憶及膽堿能系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷(icariin,ICA)對β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-peptide25-35，Aβ25-35)所致原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的毒性、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)模型大鼠的學(xué)習(xí)、記憶及膽堿能系統(tǒng)的影響并探討其可能的作用機制，為其用于防治AD提供理論依據(jù)。 方法：原代培養(yǎng)乳鼠大腦皮層神經(jīng)元，以凝聚態(tài)的Aβ25-35(20μmolL-1)損傷神經(jīng)元，體外建立細(xì)胞毒性模型。設(shè)置空白

2、組、模型組、ICA低、中、高劑量組(0.25mg·L-1、0.5 mg·L-1、1.0 mg·L-1)、陽性對照組(Tacrine，THA0.5 mg·L-1)、協(xié)同組(THA0.5 mg·L-1+ICA 0.5 mg·L-1)，通過MTT檢測細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測細(xì)胞損傷程度、以及觀察其病理形態(tài)學(xué)的改變，評價ICA對Aβ25-35誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的保護作用；96只SD大鼠分為8組，分別為空白組、假手術(shù)組、模型組、I

3、CA低、中、高劑量組(30 mg·kg-1·d-1,60 mg·kg-1·d-1，120 mg·kg-1·d-1)、陽性對照組(THA10mg·kg-1·d-1)、協(xié)同組(THA 10mg·kg-1·d-1+ICA60 mg·kg-1·d-1)，海馬內(nèi)注射凝聚態(tài)Aβ25-35 10μg制備AD大鼠模型，連續(xù)灌胃給藥14天，Morris水迷宮檢測大鼠空間辨別學(xué)習(xí)記憶能力：化學(xué)法檢測大鼠海馬組織膽堿酯酶(acetylcholinestera

4、se，AChE)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)化酶(choline acetyltransferase，ChAT)的活性變化；實時定量PCR檢測AChE、ChAT、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受體酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)的mRNA的表達。 結(jié)果：離體細(xì)胞實驗：MTT，LDH結(jié)果顯示ICA對Aβ25-35誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元的損傷有明顯的抑制作用，且呈劑量依賴性。細(xì)胞經(jīng)Aβ2

5、5-35損傷后失去折光性，胞體輪廓模糊，突起減少或回縮、斷裂，HE檢測顯示模型組細(xì)胞還有核固縮、濃染等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，各給藥組損傷比模型組明顯減輕，僅見少部分細(xì)胞輕度腫脹，部分細(xì)胞胞漿皺縮；整體動物實驗結(jié)果顯示：與模型組比較，ICA連續(xù)給藥14天可以明顯縮短大鼠在定位航行實驗中的逃避潛伏期及搜索距離(P<0.05)，增加空間探索實驗中大鼠在原安全島所在象限的搜索時間及原安全島所在象限游泳距離占總距離的百分比(P<0.05)；與模型組比較，

6、ICA中、高劑量組、協(xié)同組和陽性對照組均能抑制Aβ25-35損傷所致海馬、AChE活性的增高(ICA60mg·kg-1·d-1 P<0.05，ICA120 mg·kg-1·d-1、THA10 mg·kg-1·d-1、THA+ICA60 mg·kg-1·d-1P<0.01)，與陽性對照組比較，ICA低劑量組不能抑制AChE活性的增高(P<0.05)；與模型組比較，協(xié)同組及ICA中、高劑量組可以增加ChAT的活性，并促進ChAT、BDNF及