青蒿素對宮頸癌HeLa和Siha細胞裸鼠移植瘤放射增敏及作用機制的研究.pdf

1、目的：探討青蒿素(artemisinin)對p53突變型宮頸癌HeLa細胞及p53野生型宮頸癌Siha細胞的裸鼠移植瘤模型的放射敏感性的影響。通過比較分析青蒿素對具有不同p53功能的宮頸癌細胞的裸鼠移植瘤的放射敏感性,進一步研究放射增敏作用的機理。
　　 方法：每種細胞建立20只裸鼠皮下宮頸癌移植瘤模型,將荷瘤鼠隨機分為空白對照組、青蒿素組、單純照射組、照射加青蒿素組。空白對照組及單純照射組給予植物油0.2mL／d腹腔注射,青蒿

2、素組及照射加青蒿素組給予植物油與青蒿素的懸濁液50mg.kg-1.d-1腹腔注射,各組用藥均連續(xù)6d。6d后照射組給予荷瘤鼠右后肢移植腫瘤10Gy劑量一次性局部照射,照射后第14天脫頸處死荷瘤鼠。(1)測量每組腫瘤重量和體積,計算抑瘤率和腫瘤生長抑制率；(2)利用免疫組化法檢測移植瘤TUNEL細胞凋亡和腫瘤組織的微血管密度,研究青蒿素對HeLa、Siha細胞的裸鼠移植瘤的放射敏感性的影響。(3)應用流式細胞術檢測青蒿素聯(lián)合γ射線作用后,

3、HeLa和Siha細胞裸鼠移植瘤的細胞周期分布情況；(4)應用Western—blot法分析青蒿素聯(lián)合γ射線作用后對移植瘤細胞周期調控相關蛋白weel,cyclinB1,odc2表達水平的影響。
　　 結果：(1)HeLa細胞裸鼠移植瘤的照射加青蒿素組移植瘤的質量和體積與其他三組的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但青蒿素組與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Siha細胞裸鼠移植瘤的照射加青蒿素組移植瘤質量和體積與單

4、純照射組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),青蒿素組與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。HeLa細胞的青蒿素組、單純照射組、照射加青蒿素組的抑瘤率和腫瘤生長抑制率分別為4.00％、31.49％、58.03％和5.57％、29.02％、51.03％；Siha細胞各組的抑瘤率和腫瘤生長抑制率分別為0、33.00％、38.13％和0、37.39％、28.94％。(2)免疫組織化學法檢測腫瘤組織微血管密度顯示:HeLa細胞組的照射加

5、青蒿素組的微血管密度與其他三組的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但青蒿素組與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Siha細胞組的照射加青蒿素組的微血管密度與單純照射組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),青蒿素組與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(3)TUNEL法檢測凋亡顯示:HeLa細胞組的照射加青蒿素組的凋亡率與其他三組的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但青蒿素組與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05

6、):Siha細胞組的照射加青蒿素組的凋亡率與單純照射組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),青蒿素組與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(4)流式細胞儀分析細胞周期顯示:對于HeLa細胞裸鼠移植瘤組,照射加青蒿素組的G0／G1期細胞比例高于單純照射組(P<0.05),照射加青蒿素組的G2／M期細胞比例則低于單純照射組(P<0.05)；對于Siha細胞移植瘤組,照射加青蒿素組與單純照射組相比,G0／G1期、G2／M期細胞含量均無

7、明顯變化(P>0.05)；(5)Western-blot分析顯示:對HeLa細胞移植瘤組,照射加青蒿素組weel蛋白表達量較單純照射組減少,cyclinB1蛋白較單純照射組增加,cdc2蛋白變化不明顯；在Siha細胞移植瘤組,照射加青蒿素組weel蛋白、cyclinB1蛋白、cdc2蛋白表達量較單純照射組均無明顯變化。
　　 結論：(1)青蒿素聯(lián)合γ射線照射后對p53突變型宮頸癌HeLa細胞的裸鼠移植瘤的生長有明顯的抑制作用,而

8、對p53野生型宮頸癌Siha細胞的裸鼠移植瘤無明顯作用。(2)青蒿素能抑制p53突變型宮頸癌HeLa細胞裸鼠移植瘤經γ射線照射后的腫瘤組織的微血管密度,而對p53野生型宮頸癌Siha細胞裸鼠移植瘤受照后的微血管密度無影響；(3)青蒿素能增加p53突變型宮頸癌HeLa細胞裸鼠移植瘤經γ射線照射后的細胞凋亡率,而對p53野生型宮頸癌Siha細胞裸鼠移植瘤受照后的細胞凋亡率無影響；(4)青蒿素能抑制p53突變型宮頸癌HeLa細胞的裸鼠移植瘤由

9、電離輻射所誘導活化的G2／M期阻滯,從而使更多帶有放射損傷的細胞因得不到足夠時間進行修復,直接進入有絲分裂期,發(fā)生細胞死亡；而對p53野生型宮頸癌Siha細胞裸鼠移植瘤受照后的細胞周期無影響；(5)γ射線照射后,可通過增加周期蛋白weel的表達,降低cyclinB1的表達,誘導p53突變型宮頸癌HeLa細胞裸鼠移植瘤發(fā)生G2／M期阻滯；青蒿素聯(lián)合照射后使weel的表達量降低,cyclinB1的表達量增高,從而減弱G2／M期阻滯效應,發(fā)揮