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文檔簡介
1、目的: 觀察三氧化二砷(As2O3)對人宮頸癌Hela細(xì)胞放射增敏的效應(yīng),探討其對官頸癌放射增敏作用的機(jī)制,為As2O3作為官頸癌的放射增敏劑應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: MTT法測定人宮頸癌Hela細(xì)胞對As2O3藥物的敏感性,計(jì)算細(xì)胞抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對照組吸光度值)×100%,實(shí)驗(yàn)重復(fù)三遍,取平均值,結(jié)果以藥物濃度為橫坐標(biāo)、以細(xì)胞抑制率為縱坐標(biāo),通過Excel軟件繪制細(xì)胞生長抑制曲線,通過I
2、D50計(jì)算軟件計(jì)算出藥物作用48h后的半數(shù)致死劑量(ID50)。 集落形成法觀察20%ID50的As2O3對Hela細(xì)胞的放射增敏作用,計(jì)數(shù)含50個細(xì)胞以上的集落數(shù),求出細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(細(xì)胞存活率),細(xì)胞存活率的計(jì)算方法為:處理組集落形成率/對照組集落形成率,實(shí)驗(yàn)重復(fù)三遍,取平均值,結(jié)果以放射劑量為橫坐標(biāo)、以細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo),采用“多靶單擊模型”通過SPSS13.0軟件擬合細(xì)胞存活曲線,計(jì)算放射增敏比(SER)。 流式細(xì)
3、胞儀測定細(xì)胞周期,分為空白對照組(空白組)、20%ID50的As2O3組(單藥組)、單純放射組(單放組)、放射+20%IDso的As2O3組(藥放組),每個組設(shè)3個平行樣本,于25cm2的培養(yǎng)瓶中接種1×105個細(xì)胞。收集各組處理后的細(xì)胞進(jìn)行固定、染色,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的分布,用Multicycle軟件進(jìn)行分析。 免疫細(xì)胞化學(xué)法及western blotting法(按試劑盒說明書操作)檢測空白組、單藥組、單放組、藥放組在藥
4、物作用后的p21Wafl/Cipl及Bcl-2兩種蛋白表達(dá)變化情況。 結(jié)果: 1.As2O3對人宮頸癌Hela細(xì)胞的生長抑制作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng),48h時的半數(shù)致死劑量(ID50)值為10.86μmol/L。 2.As2O3對人宮頸癌Hela細(xì)胞有放射增敏作用,藥放組的細(xì)胞存活率低于單放組,其平均致死劑量(Do)及準(zhǔn)域劑量(Dq)均小于單放組(Do:2.49 Gy vs 3.45 Gy,Dq:1.03 Gy
5、 vs 1.89 Gy),放射增敏比(SER)為1.39。 3.空白組、單藥組、單放組、藥放組在藥物作用48h后G2/M期的細(xì)胞比例分別為12.45±1.88、18.91±1.65、18.42±2.29、31.07±6.66,統(tǒng)計(jì)分析表明單放及單藥均能提高G2/M期的細(xì)胞比例(P<0.05,P=0.012,P=0.007),放射及As203藥物聯(lián)合則G2/M期的細(xì)胞比例提高更顯著(P<0.01,P=0.000)。 4.免
6、疫細(xì)胞化學(xué)法及Western blot檢測各組p21waf1/cip1及Bcl-2兩種蛋白表達(dá)情況基本一致,結(jié)果表明可知放射及藥物均能提高p21waf1/cip1的表達(dá)(P<0.05),放射及As203藥物聯(lián)合則p21waf1/cip1表達(dá)更高(P<0.01);放射及藥物均能降低Bcl-2的表達(dá)(P<0.05),放射及As2O3藥物聯(lián)合則Bcl-2表達(dá)更低(P<0.01)。 結(jié)論: 1.As203對人宮頸癌Hela細(xì)胞具
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