槲皮素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞放療增敏及抑制轉(zhuǎn)移的作用研究.pdf

1、目的:探討槲皮素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的輻射增敏效應(yīng)及抑制侵襲、轉(zhuǎn)移的作用，探討輻射增敏作用與給藥時(shí)序、藥物濃度的影響，探討槲皮素放射增敏及抑制轉(zhuǎn)移可能的機(jī)制。
　　方法:(1) MTT法檢測(cè)槲皮素單獨(dú)作用以及12Gy的X射線與槲皮素聯(lián)合作用時(shí)對(duì)Hela細(xì)胞增殖的抑制作用，繪制出細(xì)胞抑制率曲線，計(jì)算槲皮素對(duì)Hela細(xì)胞作用的IC50值。(2)克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察不同給藥時(shí)序、不同藥物濃度的槲皮素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的放療增敏作用，比較單

2、獨(dú)放射以及藥物與輻射聯(lián)合后細(xì)胞的成瘤能力，確定最佳給藥時(shí)序并觀察藥物濃度對(duì)放射增敏的影響。(3)流式細(xì)胞法檢測(cè)槲皮素、放射線單獨(dú)以及聯(lián)合作用后Hela細(xì)胞的周期分布及凋亡率情況。(4)光鏡及DAPI染色分別觀察不同處理后Hela細(xì)胞的凋亡變化。(5)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)分別觀察射線及槲皮素對(duì)Hela細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響。(6)Western-blot法檢測(cè)槲皮素、放射線單獨(dú)以及聯(lián)合應(yīng)用后Hela細(xì)胞中Bcl-2

3、、Bax、VEGF、MMP-9蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)不同濃度的槲皮素對(duì)Hela細(xì)胞均呈量效性和時(shí)效性的生長(zhǎng)抑制作用;不同濃度槲皮素聯(lián)合12Gy劑量射線共同作用后，Hela細(xì)胞的增殖進(jìn)一步受到不同程度的抑制，并具有濃度和時(shí)間依賴性。計(jì)算出24小時(shí)槲皮素對(duì)Hela細(xì)胞的IC50值約為120μ moL/L。考慮臨床常規(guī)放療劑量的實(shí)用性及參考文獻(xiàn)資料，后續(xù)試驗(yàn)中選取的放療劑量為4Gy，槲皮素選取高、低兩個(gè)濃度進(jìn)行比較（20％的IC

4、50值和IC50值）。(2)在先藥后放及先放后藥兩種不同時(shí)序下，單獨(dú)放射與射線聯(lián)合槲皮素作用，均能抑制Hela細(xì)胞集落形成，聯(lián)合組抑制作用更加明顯，先放后藥比先藥后放時(shí)序的抑制效果更加具有優(yōu)勢(shì)，因此，在后續(xù)試驗(yàn)中采用先放后藥作用時(shí)序。(3)槲皮素與放射線均能使細(xì)胞周期阻滯于放射敏感的G2/M期，放射線與槲皮素聯(lián)合作用比單獨(dú)作用效果更加顯著。(4)光鏡下觀察射線單獨(dú)作用后，細(xì)胞的形態(tài)無(wú)明顯的變化，槲皮素單獨(dú)作用后，細(xì)胞間隙變寬，細(xì)胞形態(tài)不

5、規(guī)整，呈不同程度的皺縮，槲皮素聯(lián)合射線處理后，細(xì)胞形態(tài)變化更加明顯，間隙進(jìn)一步增寬，細(xì)胞變圓、皺縮，且高濃度槲皮素作用的細(xì)胞形態(tài)改變更加顯著;DAPI染色后，射線及槲皮素均可引起細(xì)胞核不同程度的皺縮，二者合用后，大量細(xì)胞核皺縮、碎裂，高濃度藥物作用細(xì)胞核變化更加顯著。(5)射線照射24h后細(xì)胞遷移與侵襲能力增加，槲皮素對(duì)HeLa細(xì)胞的遷移與侵襲有抑制作用，槲皮素與射線共同處理細(xì)胞后，與空白組及單放組比較仍具有明顯的抑制遷移作用。(6)W

6、estern blot法檢測(cè)各處理組Bax、Bcl-2、VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)情況，結(jié)果表明槲皮素單藥，以及聯(lián)合放射線均能升高Bax蛋白的表達(dá)，降低Bcl-2蛋白的表達(dá);射線單獨(dú)作用后VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)在一定時(shí)間內(nèi)略有增加，槲皮素處理后VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)降低，二者共同處理后VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)較空白組與單放組降低。
　　結(jié)論:(1)槲皮素及X射線均能抑制Hela細(xì)胞增殖。(2)槲皮素對(duì)Hela細(xì)胞