β-欖香烯對(duì)宮頸癌細(xì)胞株HeLa體外放射增敏及作用機(jī)制的研究.pdf

1、放射治療是宮頸癌治療的主要手段之一。由于腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性及局部微環(huán)境等因素的影響往往致放射治療療效不盡如人意,因此,尋找有效的宮頸癌放射增敏劑具有重要的臨床意義。
　　近年來(lái),人們發(fā)現(xiàn)某些中藥具有放射增敏效應(yīng)。欖香烯是從姜科植物溫莪術(shù)中提取的非細(xì)胞毒性抗腫瘤藥,具有廣譜抗腫瘤作用,毒副作用小,能提高腫瘤放射增敏效應(yīng)。過(guò)去對(duì)欖香烯抗癌作用機(jī)制的研究?jī)H限于欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、分化和凋亡、免疫原性等的影響,關(guān)于其作用靶點(diǎn)研究很少報(bào)

2、道。
　　本研究選用低細(xì)胞毒性的β-欖香烯作用于宮頸癌HeLa細(xì)胞,觀察β-欖香烯對(duì)HeLa細(xì)胞體外放射增敏作用,初步探討放射增敏作用靶點(diǎn),為β-欖香烯放射增敏劑臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　目的:研究β-欖香烯對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株放射敏感性的影響,探討其作用與CDK1、cyclin B1、bcl-2及P53表達(dá)的關(guān)系。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)采用人宮頸癌HeLa細(xì)胞作為研究對(duì)象,實(shí)驗(yàn)組用含不同濃度(10μg/ml、20μ

3、g/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)β-欖香烯RPMI-1640培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),在不同照射劑量(2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)下直線(xiàn)加速器6MV-X線(xiàn)照射,采用MTT法測(cè)定不同濃度β-欖香烯對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率;克隆形成率觀察β-欖香烯對(duì)HeLa細(xì)胞的放射增敏作用;熒光定量RT-PCR法檢測(cè)不同劑量β-欖香烯(30μg/ml、45μg/ml)作用24h、48h后CDK1、cyc

4、lin B1、bcl-2及P53的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1、β-欖香烯作用HeLa細(xì)胞24h的半數(shù)抑制濃度(IC50)為112.6μg/ml,β-欖香烯對(duì)HeLa細(xì)胞有顯著抑制作用,隨著藥物濃度的增大,細(xì)胞的抑制率逐漸增高(p<0.05)。
　　2、低細(xì)胞毒濃度的β-欖香烯(30μg/ml)對(duì)HeLa細(xì)胞進(jìn)行放射敏感性實(shí)驗(yàn),結(jié)果提示:相同劑量下,30μg/mlβ-欖香烯聯(lián)合放療組A570nm值均較單純放療組降低。

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析組間有顯著性差異(P<0.05)。初步判斷β-欖香烯對(duì)HeLa細(xì)胞有放射增敏作用。
　　3、不同劑量β-欖香烯(30μg/ml和45μg/ml)作用HeLa細(xì)胞24h后細(xì)胞克隆數(shù)及存活率的檢測(cè),結(jié)果顯示:30μg/ml、45μg/mlβ-欖香烯作用24h后聯(lián)合上述照射劑量放療組較單純放療組細(xì)胞克隆數(shù)明顯下降,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組間有顯著性差異(P<0.05);且30μg/ml、45μg/ml兩濃度組之間亦有顯著性差異(p<0.

6、05)。因此,克隆形成率進(jìn)一步證明β-欖香烯在低細(xì)胞毒性濃度下對(duì)HeLa細(xì)胞有放射增敏作用,且隨藥物濃度逐漸增加,放射增敏作用逐漸增強(qiáng)。
　　4、30μg/ml與45μg/mlβ-欖香烯乳作用24h、48h后,熒光定量PCR法測(cè)定CDK1、Cyclin B1、bcl-2及p53的表達(dá)。結(jié)果顯示,β-欖香烯單獨(dú)作用HeLa細(xì)胞后,可下調(diào)細(xì)胞周期分子CDK1、Cyclin B1,下調(diào)細(xì)胞凋亡分子bcl-2以及上調(diào)p53的表達(dá)。

7、　　結(jié)論:
　　1.β-欖香烯乳對(duì)Hela細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,其IC50值、IC20值、IC10值分別為112.6μg/ml、45.34μg/ml、29.56μg/ml,其抑制作用與劑量呈正相關(guān)性。
　　2.β-欖香烯乳在低細(xì)胞毒性劑量下對(duì)Hela細(xì)胞有放射增敏作用,并隨劑量的增加而增強(qiáng),其增敏作用與劑量呈正相關(guān)性。
　　3.β-欖香烯作用Hela細(xì)胞,可下調(diào)Cyclin B1、bcl-2及上調(diào)p53的表達(dá)。由