放射性視網(wǎng)膜病變大鼠玻璃體與血清血管內(nèi)皮生長因子的相關(guān)研究.pdf

1、目的:通過放射性<'60>Co照射SD大鼠制作放射性視網(wǎng)膜病變(RadiationRetinopathy，RR)大鼠模型，檢測RR大鼠血清、玻璃體中血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial GrOWth Factor，VEGF)的含量，探討在RR的發(fā)展中，VEGF的作用。 方法:取45只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對照組15只，實(shí)驗(yàn)組30只(10Gy組15只，30Gy組15只)。0.5％戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，固定

2、于<'60>Co治療機(jī)治療床，照射野大小為2×2cm，光野上界位于雙眼后眥連線，下界位于雙耳后連線。10Gy組：吸收劑量為0.8/Min，連續(xù)照射12.5分鐘；30Gy組：吸收劑量為0.8/Min，連續(xù)照射37.5分鐘。分別于3個月，6個月及9個月處死各組大鼠采集標(biāo)本。過量麻藥麻醉后，使用一次性消毒注射器在角膜緣進(jìn)行穿刺，抽取玻璃體約0.2ML(均為右眼)，置入一80℃冰箱中保存。在抽取玻璃體后，剪開大鼠肋骨，暴露胸腔，用一次性注射器插

3、入大鼠左心抽取血液2Ml，放置入真空采血試管中進(jìn)行離心(1000r/min)，20分鐘后取上清液0.5ml，移入0.5mlEp管中密封，置低溫冰箱一80℃保存。在眼球12點(diǎn)鐘位置用5/0線定位，分離眼球的肌肉，結(jié)膜和鞏膜，取出大鼠的右側(cè)眼球，放置于4％甲醛PBS液中固定24小時(shí)。剪開角膜去除晶狀體，用蒸餾水漂洗數(shù)次，將視網(wǎng)膜不間斷剪開，保留視乳頭，剝離眼球壁內(nèi)側(cè)的視網(wǎng)膜層，放入清潔的培養(yǎng)皿中，用蒸餾水反復(fù)漂洗。取出3％胰蛋白酶液加入培養(yǎng)

4、皿中，放入37℃恒溫震蕩水浴箱中振蕩消化數(shù)小時(shí)。將消化好的視網(wǎng)膜放入蒸餾水中漂洗數(shù)次后放在清潔玻片上，干燥后染色，光鏡觀察。從冰箱中取出玻璃體及血清標(biāo)本，置于室溫下10Min待測。使用大鼠VEGF ELISA試劑盒進(jìn)行檢測EGF含量。ELISA測定大鼠血清中VEGF含量：方法同玻璃體測定。試驗(yàn)結(jié)果使用均數(shù)(x<'->)和標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析(one way-ANOVA)及相關(guān)分析。

5、 結(jié)果:①30Gy組大鼠玻璃體eOVEGF濃度：正常對照組(77.04±4.36)ng/ml；3個月組(84.66±5.97)ng/ml；6個月組(316.27±9.62)ng/ml；9個月組(663.98±5.93)ng/ml。3個月組、6個月組與9個月組VEGF濃度比正常對照組濃度增高(P<0.01)；3個月組與6個月組統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異(P>0.05)，9個月組濃度最高；30Gy組大鼠血清中VEGF濃度：正常對照組(6.78±3.6

6、1)ng/ml；3個月組(5.73±2.65)ng/ml；6個月組(7.09±0.85)ng/ml：9個月組(7.16±2.61)ng/ml。與正常對照組比較，9個月組、6個月組、3個月組濃度，統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異(P>0.05)；③10Gy組大鼠玻璃體中VEGF濃度：正常對照組(70.27±1.65)ng/ml；3個月組(72.32±2.16)ng/ml；6個月組(75.06±5.55)ng/ml；9個月組(85.05±4.46)ng/ml