組織微陣列技術(shù)在SV40與人膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)性研究中的應(yīng)用.pdf

1、本文分四部分論述了組織微陣列技術(shù)在SV40與人膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)性研究中的應(yīng)用。 第一部分人膠質(zhì)瘤組織芯片的構(gòu)建。 目的：建立人腦膠質(zhì)瘤組織微陣列(組織芯片)，為進(jìn)行膠質(zhì)瘤相關(guān)的基礎(chǔ)研究提供實驗工具。 方法：根據(jù)文獻(xiàn)采用半手工工藝，適當(dāng)進(jìn)行改良，利用國內(nèi)生產(chǎn)的組織芯片點樣儀同時構(gòu)建二個U8位組織芯片。 結(jié)果：根據(jù)標(biāo)本情況精心設(shè)計微陣列，經(jīng)過預(yù)制受體蠟塊、供體蠟塊的定位、取樣、連續(xù)切片、托片與烤片等過程，在

2、二塊36mm×26mm的蠟塊制作成相同的n8位點、孔徑L5mm的組織芯片蠟塊，并切成4μm的微陣列。肉眼觀察，點陣分布均勻一致，蠟塊無裂紋，載玻片上點陣無脫落，但其中有4個點陣發(fā)生移位，移位率0．03％。HE切片顯示取樣組織邊緣銳利，無明顯組織擠壓和結(jié)構(gòu)變形，所取組織點陣符合研究要求。 結(jié)論： 1．本研究構(gòu)建的二個包含有人膠質(zhì)瘤、其它顱內(nèi)常見腫瘤、膠質(zhì)瘤動物移植瘤、基因工程鼠腦腫瘤、正常腦組織和人體其它正常組織在內(nèi)的組織

3、芯片，為膠質(zhì)瘤相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)功能的研究進(jìn)而揭示膠質(zhì)瘤的分子病因提供了高效、便捷的研究工具。 2．構(gòu)建高質(zhì)量的組織芯片，有賴于建立標(biāo)準(zhǔn)化的標(biāo)本蠟塊庫。 3．供體蠟塊準(zhǔn)確的病理學(xué)診斷與定位關(guān)系到組織芯片檢測結(jié)果的可靠性。 第二部分SV40Tag在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其意義。 目的：通過對SV40Tag在腦膠質(zhì)瘤組織芯片中的表達(dá)情況的檢測分析SV40感染與膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)的可能性。 方法：利用第

4、一部分制作的膠質(zhì)瘤組織芯片，采用免疫組織化學(xué)的方法檢測SV40Tag在膠質(zhì)瘤等各類組織中的表達(dá)情況，比較人膠質(zhì)瘤與顱內(nèi)非膠質(zhì)瘤、腦腫瘤與正常腦組織、不同級別的膠質(zhì)瘤、不同類型的膠質(zhì)瘤之間SV40Tag表達(dá)的差異。借助CMIAS多功能真彩色圖象分析系統(tǒng)判定免疫組化陽性結(jié)果。用SPSSl0．O統(tǒng)計學(xué)軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。 結(jié)果：①本組92例腦腫瘤中，膠質(zhì)瘤陽性表達(dá)SV40Tag65．8％；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，膠質(zhì)瘤與非膠質(zhì)瘤之間比較

5、，SV40Tag的陽性表達(dá)無顯著差異。②隨著膠質(zhì)瘤級別的上升陽性表達(dá)率增加，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，提示SV40Tag的表達(dá)與膠質(zhì)瘤的惡性程度呈顯著正相關(guān)。③不同類型膠質(zhì)瘤陽性表達(dá)SV40Tag無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。④正常腦組織中未見到SV40Tag的表達(dá)，與腦腫瘤組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：SV40Tag在正常組織中不表達(dá)，大部分腦腫瘤組織中表達(dá)，表明SV40病毒基因感染與腫瘤發(fā)生相關(guān)。就膠質(zhì)瘤而言，隨其惡性程度增加而表達(dá)量增加，表明其不但

6、是膠質(zhì)瘤發(fā)生還是膠質(zhì)瘤發(fā)展的分子病因。 第三部分抑癌基因助和病毒源性癌基因SV40Tag在人腦膠質(zhì)瘤組織芯片中的表達(dá)的初步研究。 目的：通過對Pb基因和SV40Tag基因在相同的組織芯片中檢測，分析兩者在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的相互關(guān)系。 方法：利用第一部分制作的組織芯片，采用免疫組織化學(xué)的方法檢測Pb抑癌蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況，比較人膠質(zhì)瘤與顱內(nèi)非膠質(zhì)瘤、腦腫瘤與正常腦組織、不同級別的膠質(zhì)瘤之間Pb抑癌蛋白表達(dá)的差

7、異，對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，明確差異的顯著性：采用免疫組織化學(xué)和免疫熒光雙重標(biāo)記(FITC-CY3)的方法觀察SV40Tag與PB表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果：①本組膠質(zhì)瘤82例，Pb陽性表達(dá)率為64．6％(53／82)；腦良性腫瘤總的Pb陽性表達(dá)率達(dá)87．5％，正常對照的腦組織陽性表達(dá)Pb蛋白77．8％(7／9)，Pb蛋白的陽性表達(dá)在膠質(zhì)瘤與非膠質(zhì)瘤之間有顯著差異，腦腫瘤與正常腦組織間無顯著差異。②隨著膠質(zhì)瘤級別的上升Pb陽性表達(dá)率下降，膠質(zhì)瘤工

8、、II、III、工V級間陽性細(xì)胞百分率比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P

9、異常膠質(zhì)瘤惡性程度增加而降低，這一結(jié)果表明：兩者在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中，前者起的是癌基因的激活、后者起的是抑癌基因失活的作用；兩者在一部分病例中的共表達(dá)，還間接表明SV40Tag與Pb蛋白特異性的結(jié)合可使Rb失去活性。 第四部分信號傳導(dǎo)基因IRS一1和病毒源性癌基因SV40Tag在膠質(zhì)瘤組織芯片中表達(dá)的初步研究。 目的：通過對信號傳導(dǎo)通路IRS—l蛋白和病毒源性癌基因SV40Tag在相同的組織芯片中檢測，分析兩者在腦膠質(zhì)瘤發(fā)

10、生發(fā)展中的作用。 方法：利用自制的膠質(zhì)瘤組織芯片，采用免疫組織化學(xué)的方法檢測IRS-1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況，比較人膠質(zhì)瘤與顱內(nèi)非膠質(zhì)瘤、腦腫瘤與正常腦組織、不同級別的膠質(zhì)瘤之間IRS一1表達(dá)的差異，對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，明確差異的顯著性；采用免疫組織化學(xué)和免疫熒光雙重標(biāo)記(FITC-CY3)的方法觀察SV40Tag與IRS-1表達(dá)情況。 結(jié)果：①本組膠質(zhì)瘤82例，IRS一1陽性表達(dá)率為48．5％(40／82)：腦良性腫瘤

11、僅1例表達(dá)，正常對照的腦組織陽性表達(dá)率22．2％(2／9)，IRS一1的陽性表達(dá)在膠質(zhì)瘤與非膠質(zhì)瘤之間有顯著差異(P<0．05)。②隨著膠質(zhì)瘤級別的上升IRS一1陽性表達(dá)率上升，膠質(zhì)瘤I、II、III、IV級間陽性細(xì)胞百分率比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P