Notch-1基因與人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：
　　觀(guān)察上調(diào)和下調(diào)Notch-1基因表達(dá)時(shí)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的自噬現(xiàn)象，探討Notch-1基因參與人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬的可能機(jī)制。
　　方法：
　　利用表達(dá)Notch1-shRNA和Notch-1胞內(nèi)段（Notch-1 intracellular domain, NICD）的慢病毒感染人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和Western Blotting法鑒定Notch-1表達(dá)下調(diào)或NICD表達(dá)上調(diào)的U251細(xì)

2、胞；應(yīng)用單丹（磺）酰戊二胺（Monodansylcadaverine，MDC）染色法觀(guān)察細(xì)胞自噬現(xiàn)象；通過(guò)Western-blotting和細(xì)胞免疫染色法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC-3（microtubule-associated protein1 light chain3，微管相關(guān)蛋白1輕鏈3）和Beclin-1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　Notch-1RNA干擾慢病毒能有效下調(diào)U251細(xì)胞Notch-1的表達(dá)，而NICD過(guò)表

3、達(dá)慢病毒能顯著上調(diào)U251細(xì)胞 NICD的表達(dá)；MDC熒光染色法發(fā)現(xiàn)， Notch-1下調(diào)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中可觀(guān)察到點(diǎn)狀自噬囊泡（autophagic vacuoles，AVs），Western-blotting和細(xì)胞免疫染色法結(jié)果顯示，在Notch-1表達(dá)下調(diào)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中，自噬相關(guān)蛋白LC-3和Beclin-1表達(dá)增高。
　　結(jié)論：
　　Notch-1表達(dá)下調(diào)的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞可觀(guān)察到自噬現(xiàn)象，Not