富亮氨酸膠質(zhì)瘤失活基因（LGL1）與腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景 染色體10q24或10q26在超過(guò)80％的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中發(fā)生雜合性缺失。Chernova[1]等人采用定位克隆技術(shù)分離出一種新的基因，LGl1(富亮氨酸膠質(zhì)瘤失活基因)，這種基因在缺乏任何正常10號(hào)染色體的T98膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中由于t(10；19)(q24；q13)的平衡易位發(fā)生重排。A172膠質(zhì)瘤細(xì)胞株和一些膠質(zhì)瘤中也檢測(cè)到LGl1基因的重排。這些重排導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細(xì)胞中LGl1表達(dá)的完全缺失。LGI1基因編碼分子量為60

2、kD的蛋白而且包含了帶有保守序列的3.5個(gè)富亮氨酸重復(fù)序列(LRR)。在LRR區(qū)內(nèi)，LGl1與許多跨膜和細(xì)胞外蛋白高度同源，這些蛋白的功能是作為受體和黏附蛋白。LGl1主要在神經(jīng)組織尤其是腦組織中表達(dá)；其表達(dá)在低惡性腦腫瘤中減少，而在惡性膠質(zhì)瘤中明顯減少甚至缺乏。LGI1定位于染色體10q24區(qū)，在惡性腦腫瘤中發(fā)生重排或失活提示它是與神經(jīng)膠質(zhì)瘤進(jìn)程相關(guān)的候選腫瘤抑制基因。 目的 檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤組織LGl1基因mRNA的表達(dá)

3、，探明其與腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系。對(duì)腦膠質(zhì)瘤組織LGl1基因編碼區(qū)的突變情況進(jìn)行檢測(cè)，以發(fā)現(xiàn)靶DNA片段中知位置的堿基突變，探討基因突變?cè)谀z質(zhì)瘤發(fā)生、惡性進(jìn)展過(guò)程中導(dǎo)致LGl1基因表達(dá)降低所起的作用。 材料與方法 1.收集天津市第一中心醫(yī)院、天津市環(huán)湖醫(yī)院手術(shù)切除的27例腦膠質(zhì)瘤、2例腦膜瘤、2例瘤旁及2例正常腦組織標(biāo)本；提取組織標(biāo)本RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA； 2.根據(jù)LGI1基因外顯子設(shè)計(jì)特異性引物。采用RT-PCR方法

4、擴(kuò)增6個(gè)外顯子，半定量方法檢測(cè)LGI1mRNA表達(dá)水平。提取基因組DNA，擴(kuò)增全部外顯子，采用SSCP銀染分析產(chǎn)物，SSCP銀染分析發(fā)現(xiàn)異常泳動(dòng)條帶進(jìn)行DNA測(cè)序。 結(jié)果 1、腦膠質(zhì)瘤組的LGI1mRNA表達(dá)水平低于正常腦組織和腦膜瘤。 2、腦膠質(zhì)瘤中，WHOⅣ級(jí)的腦膠質(zhì)瘤LGImRNA表達(dá)低于WHOⅡ級(jí)和Ⅲ級(jí)的腦膠質(zhì)瘤。 3、瓊脂糖凝膠電泳未檢測(cè)到第9號(hào)膠質(zhì)瘤標(biāo)本第1a外顯子處擴(kuò)增產(chǎn)物以及第16號(hào)和17

5、號(hào)膠質(zhì)瘤標(biāo)本第8c外顯子處擴(kuò)增產(chǎn)物。 4、未在18例膠質(zhì)瘤標(biāo)本中檢測(cè)到電泳條帶異常。 結(jié)論 1.膠質(zhì)瘤中LGI1mRNA表達(dá)水平低于正常組織或腦膜瘤組織，提示LGI1與膠質(zhì)瘤的發(fā)生關(guān)系密切，是膠質(zhì)瘤中發(fā)生失活的靶基因。 2.本實(shí)驗(yàn)未在18例膠質(zhì)瘤標(biāo)本中檢測(cè)到LGl1基因的突變?；蛲蛔兛赡懿皇荓Gl1在膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展過(guò)程中失活的主要原因，在腦腫瘤發(fā)生中LGl1基因的未知功能和失活的準(zhǔn)確機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。