鉤端螺旋體脈沖場(chǎng)凝膠電泳標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)建立及初步應(yīng)用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)旨在將PFGE分型技術(shù)引入鉤體，建立我國(guó)鉤體PFGE標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，進(jìn)一步從染色體DNA角度分析鉤體分類特征，為遺傳學(xué)分類奠定基礎(chǔ)。 參照目前美國(guó)CDC及亞太地區(qū)PulseNet提供的其它病原體PFGE標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，結(jié)合鉤體菌株特性，對(duì)菌體基因組染色體DNA純化技術(shù)、限制性內(nèi)切酶消解方案及脈沖場(chǎng)電泳參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，初步建立了我國(guó)鉤體脈沖場(chǎng)凝膠電泳標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，并對(duì)我國(guó)15群15型問(wèn)號(hào)鉤體標(biāo)準(zhǔn)菌株和16群21型雙曲鉤體標(biāo)準(zhǔn)

2、菌株進(jìn)行鑒定分析，獲得了高清晰度酶切圖譜，各株菌都有獨(dú)特的帶型分布，且結(jié)果重復(fù)性好，分辨率高，圖譜質(zhì)量達(dá)到PulseNet的要求，實(shí)驗(yàn)室間具有可比性。 進(jìn)一步對(duì)我國(guó)四川、安徽、江西、湖南四省的245株地方分離株進(jìn)行鑒定分析，并與15群15型標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)我國(guó)鉤體的黃疸出血群、流感傷寒群、澳洲群、犬群、七日熱群帶型與其標(biāo)準(zhǔn)菌株帶型相似，都具有優(yōu)勢(shì)基因型，不同血清群之間帶型完全不同，同一血清群內(nèi)帶型差異較小，同一血清型表

3、現(xiàn)出較多帶型，但相似性很高。賽羅群內(nèi)不同血清型之間帶型差異較大，但是同一血清型內(nèi)帶型高度相似。秋季群帶型最為復(fù)雜，與其標(biāo)準(zhǔn)株帶型沒有相似之處，各帶型之間差異較大。其它血清群菌株數(shù)量太少，在本研究中未發(fā)現(xiàn)相同的結(jié)論。本實(shí)驗(yàn)所使用的245株分離株中，其中有38株未能鑒定出血清群，通過(guò)聚類分析，37株能夠判斷血清群。 本實(shí)驗(yàn)中所有標(biāo)準(zhǔn)菌株原始資料完整，血清學(xué)分類可靠，涵蓋了我國(guó)鉤體常見的血清群和血清型，可以作為鉤體PFGE數(shù)據(jù)庫(kù)中的基